Sprievodca výhodami a nevýhodami multifotónových laserových skenovacích mikroskopov
1. Pri excitácii červeným alebo infračerveným svetlom je rozptyl svetla malý a rozptyl malých častíc je nepriamo úmerný štvrtej mocnine vlnovej dĺžky.
2. Viac rozptýlených fotónov zo zobrazovacieho prierezu- možno zhromaždiť bez potreby dierok.
3. Dierky nedokážu rozlíšiť rozptýlené fotóny vyžarované z rozostrených alebo ohniskových oblastí a multifotóny majú lepší pomer signálu-k{2}}šumu pri hĺbkovom zobrazovaní.
4. Ultrafialové alebo viditeľné svetlo používané na excitáciu jedného fotónu je ľahko absorbované a zoslabené vzorkou predtým, ako lúč dosiahne ohniskovú rovinu, čo sťažuje excitáciu hlbokých vrstiev.
5. Z hľadiska pozorovania biologickou mikroskopiou je prvoradým hľadiskom nepoškodzovať aktívny stav samotného organizmu, udržiavať cirkuláciu vody, koncentráciu iónov, kyslíka a živín. V oblasti pozorovania svetla musí tepelná aj fotónová energia zostať v rámci dávky ožiarenia a svetelná energia, ktorá nepoškodí bunky.
6. Multifotónová mikroskopia má mnoho výhod. Pokiaľ ide o trojrozmerné-rozlíšenie, hĺbkovú inváziu, účinnosť rozptylu, osvetlenie pozadia, pomer signálu-k{4}}šumu, ovládanie atď., existujú vlastnosti, ktoré predchádzajúce laserové mikroskopy nemajú alebo ich nedokážu prekonať
Nevýhody multifotónového laserového skenovacieho mikroskopu:
1. Len pre fluorescenčné zobrazovanie.
2. Ak vzorka obsahuje chromofóry, ktoré môžu absorbovať excitačné svetlo, vzorka môže byť vystavená tepelnému poškodeniu.
3. Rozlíšenie je mierne znížené, hoci sa dá zlepšiť súčasným využitím konfokálnych malých otvorov, dochádza k strate signálu.
4. Vzhľadom na obmedzenia drahých ultrarýchlych laserov sú náklady na multifotónové skenovacie mikroskopy relatívne vysoké.
