Základná štruktúra konfokálnej fluorescenčnej mikroskopie
(1) Skenovací modul
Skenovací modul pozostáva hlavne z dierkovej svetelnej lišty (kontrola hrúbky optických plátkov), spektroskopu (zmena smeru šírenia svetla podľa vlnovej dĺžky), emisného fluorescenčného kolorimetra (výber svetla v určitom rozsahu vlnových dĺžok na detekciu) a detektor (elektrónka fotonásobiča). Zmiešaná fluorescencia vo fluorescenčnej vzorke vstupuje do skenera a po jej výbere pomocou detekčnej dierkovej svetelnej lišty, spektrometra a kolorimetra sa rozdelí na rôzne monochromatické fluorescencie, ktoré sa detegujú v rôznych fluorescenčných kanáloch a vytvárajú zodpovedajúce konfokálne obrazy. Súčasne je možné na obrazovke počítača zobraziť niekoľko paralelných monochromatických fluorescenčných obrazov a ich zložených obrazov.
(2) Systém fluorescenčnej mikroskopie
Mikroskop je hlavnou zložkou LSCM, ktorá súvisí s kvalitou zobrazenia systému. Optická dráha mikroskopu môže byť jednoducho vložená do nekonečne vzdialeného optického systému s optickými možnosťami bez ovplyvnenia kvality zobrazenia a presnosti merania. Objektívom by mal byť apochromatický objektív s plochým poľom s veľkou numerickou apertúrou, ktorý je výhodný pre získavanie fluorescencie a jasné zobrazovanie. Konverzia skupiny šošoviek objektívu, výber skupiny farebných filtrov, nastavenie pohybu stolíka a uzamknutie ohniskovej roviny pamäte by malo byť automaticky riadené počítačom.
Fluorescenčný mikroskop používaný v laserovej skenovacej konfokálnej mikroskopii je vo všeobecnosti rovnaký ako bežný fluorescenčný mikroskop, ale má svoje vlastné charakteristiky: musí byť pripojený ku skeneru, aby laser mohol vstúpiť do objektívu mikroskopu, aby ožiaril vzorku a vytvoril fluorescencia emitovaná vzorkou dosiahne detektor; Vyžaduje sa zariadenie na konverziu svetelnej dráhy, ktoré premieňa ortuťové výbojky na lasery a je možné nastaviť intenzitu svetla ortuťovej výbojky.
(3) Bežné lasery
Laserové zdroje používané v laserovej skenovacej konfokálnej mikroskopii zahŕňajú jednoduché laserové a multilaserové systémy a bežne používané lasery zahŕňajú nasledujúce tri typy:
Polovodičový laser: 405nm (blízko ultrafialovej spektrálnej čiary)
Argónový iónový laser: 457nm, 477nm, 488nm, 514nm (modré zelené svetlo)
He-Ne laser: 543nm (zelené svetlo He-Ne zelený laser) 633nm (červené svetlo He-Ne červený laser)
UV laser (UV laser): 351 nm, 364 nm (UV svetlo)
(4) Pomocné vybavenie
Vzduchom chladené, vodou chladené chladiace systémy a regulované napájacie zdroje.
Základným pracovným princípom laserového skenovacieho konfokálneho mikroskopu je najprv emitovať z lasera určitú vlnovú dĺžku excitačného svetla. Po zosilnení svetlo prechádza cez osvetlenú dierkovú svetelnú lištu v skeneri a vytvára bodový svetelný zdroj. Objektív sa zameriava na ohniskovú rovinu vzorky a zodpovedajúce osvetlené body na vzorke sú excitované a emitujú fluorescenciu. Po prechode cez svetelnú lištu detekčného otvoru sa dostane k detektoru a zobrazí sa na monitorovacej obrazovke počítača. Týmto spôsobom sa vytvorí úplný konfokálny obraz fluorescenčnými obrazmi každého bodu vzorky v ohniskovej rovine, ktorá sa nazýva svetelný rez.
