Biologický mikroskop týkajúci sa objemu tkanivových blokov
Biologická mikroskopia Doteraz sú fixácia za studena, zmrazené ultratenké rezy a lyofilizácia rutinnými metódami na röntgenové mikrorezy tkanív a buniek. Nasledujú podrobnosti o tejto metóde:
Biologické mikroskopy. Pri mikroskopoch s kondenzorom možno kondenzorom pohybovať hore a dole, aby sa dosiahol mierny jas. Okrem toho je možné zmeniť clonu variabilných svetelných diód, aby sa dosiahol mierny jas 9b. Ak je svetlo jasné, kondenzor môže byť primerane zdvihnutý a clona premenlivého svetla môže byť primerane zväčšená. Ak je svetlo príliš silné, kondenzor sa môže primerane znížiť a clona krížového svetelného lúča sa môže primerane znížiť. Ak sa v tejto situácii stále cítite oslnivo, môžete si vybrať vhodný filter a umiestniť ho na držiak pod kondenzorom. Týmto spôsobom môžete získať jas, ktorý vám vyhovuje. Na získanie skúseností s nastavovaním hornej a dolnej polohy kondenzora na dosiahnutie variabilnej veľkosti clony a výberom vhodných filtrov je samozrejme potrebná určitá prax.
Veľmi dôležitou otázkou v biologickej mikroskopii je, že počas procesu zberu a separácie buniek, po lyofilizácii a zaliatí živicou (FD), po zmrazení ultratenkých peliet a po lyofilizácii musí obsah 65 prvkov v každej časti analyzujte veľmi opatrne a absolútne nepoškodzujte bunky, ktoré sa majú analyzovať. Pretože röntgenová mikrooblastná analýza zahŕňa nielen veľa krokov, ale aj veľa nákladov. Ak sú po dlhom čase a viacerých krokoch analyzované bunky poškodené alebo mŕtve bunky, bola by škoda robiť nesprávne závery. Napríklad kardiomyocyty izolované po ošetrení kolagenázou majú dva tvary, jeden je dlhý tyčinkovitý a druhý okrúhly. Posledne menované sú odumierajúce bunky, ktoré sú poškodené počas izolácie buniek.
Biologická mikroskopia Obsah a distribúcia elektrolytov v týchto dvoch typoch článkov sú veľmi odlišné. Na je veľmi vysoká a K je veľmi nízka v okrúhlych kardiomyocytoch a koncentrácia Ca v lineárnych vetvách je veľmi vysoká. Po kontrole inými analytickými metódami sa dokázalo, že vysoké Na a nízke K v okrúhlych bunkách a vysoké ca v mitochondriách boli spôsobené poškodením bunkovej membrány počas procesu bunkovej separácie. Metóda fixácie buniek a tkanív za studena často spočíva v ich prvom ochladení a fixácii a potom v uložení do tekutého dusíka. Kalenie a fixácia sú veľmi dôležité pre konzervačný efekt. Živé bunky alebo čerstvé tkanivá sú bohaté na vodu. Pri ochladzovaní sa časti buniek alebo tkanív, ktoré sú v priamom kontakte s kryogénom (najmä pri ochladzovaní tekutým dusíkom), najskôr zmrazia a fixujú, čím sa vytvorí „škrupina“, ktorá bráni rozdrveniu Centrálna časť buniek bola rozdrvená. a za studena fixované. Preto sa pri vykonávaní mikro-oblastnej analýzy X-line často zistí, že v strede väčších buniek sú ľadové kryštály. Aby sa tomu zabránilo, používa sa ako drvené chladivo látka s vyššou teplotou topenia ako kvapalný dusík, ale nižšou sušinou -806c. Existuje veľa takýchto látok, ale najjednoduchšia a najlacnejšia je koncentrovaný propán (bod varu - 42.120c, bod topenia - 187.10c, molekulová hmotnosť 44,1) a rýchlosť chladenia je tiež najrýchlejšia. Jeho nevýhodou ale je, že je horľavý.
Biologický mikroskop dokáže umiestniť svalové vlákno na špeciálny rám. Keď kontrakcia svalového vlákna dosiahne určitú fázu a je potrebné ju zafixovať, tryska sa okamžite spustí, aby na svalové vlákno rozprášila tekutý propán, aby ho uhasila a zafixovala. Potom boli svalové vlákna spolu s rámom vybraté a vložené do tekutého dusíka. Ak sú krvinky alebo oddelené bunky fixované, najskôr odstred'ujte pri nízkej rýchlosti, aby sa bunky skoncentrovali, preneste bunky do malej striebornej skúmavky s dobrou tepelnou vodivosťou, vložte skúmavku do tekutého propánu a zmrazte, aby sa zafixovala. Pri fixácii pankreasu potkanov v Hallovom laboratóriu najskôr ochlaďte dva oceľové bloky tekutým héliom (alebo tekutým dusíkom), dva medené bloky upevnite kliešťami a umiestnite ich pred a za pankreas, aby sa uhasila a zafixovala maternicová žľaza. . Tkanivá alebo bunky môžu byť schladené a fixované a potom prenesené do tekutého dusíka na dlhodobé skladovanie.
