Biomikroskopia s ohľadom na objem tkanivových blokov
Biologická mikroskopia Doteraz sú fixácia za studena, zmrazené ultratenké rezy a lyofilizácia rutinnými metódami pre röntgenové mikrorezy tkanív a buniek. Podrobnosti tejto metódy sú vysvetlené takto:
V prípade biologických mikroskopov s kondenzorom sa kondenzor môže pohybovať nahor a nadol, aby bol jas mierny, a clona premenlivého svetla sa môže tiež meniť, aby sa dosiahol mierny jas 9b. Ak je svetlo slnečné, kondenzor možno vhodne zdvihnúť a apertúru variabilného svetelného zdroja primerane zväčšiť. Ak je svetlo príliš silné, kondenzorová šošovka sa môže primerane znížiť a clona pretínajúceho sa svetla sa môže primerane znížiť. Ak sa aj v tomto prípade cítite oslňujúco, môžete si vybrať vhodný filter a umiestniť ho na držiak pod kondenzátor. Tento dub bude schopný získať jas, ktorý vás uspokojí. Samozrejme, nastavenie hornej a dolnej polohy kondenzora, nastavenie veľkosti apertúry variabilného optického odčítania a výber vhodného filtra si vyžaduje určitú prax na získanie skúseností.
Veľmi dôležitou otázkou v biologickej mikroskopii je, že v procese odberu vzoriek a separácie buniek, po lyofilizácii a zaliatí živicou (FD), po zmrazení ultratenkých agregátov a po lyofilizácii, obsah 65 prvkov v každej časti treba s ním zaobchádzať opatrne. Bunky, ktoré sa majú analyzovať, nemôžu byť poškodené. Pretože röntgenová mikroanalýza zahŕňa nielen veľa krokov, ale aj veľa nákladov. Ak sú analyzované bunky poškodené alebo mŕtve bunky po dlhom čase a viacstupňovom spracovaní, je veľmi poľutovaniahodné vyvodiť nesprávne závery. Napríklad kardiomyocyty oddelené pôsobením kolagenázy majú dva tvary, jeden je v tvare dlhej tyčinky a druhý je okrúhly. Posledne menované sú odumierajúce bunky, ktoré sú poškodené počas izolácie buniek.
Biomikroskopia Množstvo a distribúcia elektrolytov v týchto dvoch typoch článkov sú úplne odlišné. Na je veľmi vysoká a K je veľmi nízka v kruhových kardiomyocytoch a koncentrácia ca v nematódach je veľmi vysoká. Po kontrole inými analytickými metódami sa dokázalo, že vysoké Na a nízke K okrúhlych buniek a vysoký Ca v mitochondriách sú spôsobené poškodením bunkovej membrány počas procesu bunkovej separácie. Spôsob fixácie buniek a tkanív ľadovým chladom je zvyčajne najprv ochladzovať a fixovať a potom ich uložiť do tekutého dusíka. Pre efekt konzervácie je veľmi dôležitá kaliaca fixácia. Živé bunky alebo čerstvé tkanivá sú bohaté na vodu. Pri ochladzovaní sa časti buniek alebo tkanív, ktoré sú v priamom kontakte s rozdrveným chladivom (najmä pri ochladzovaní tekutým dusíkom), často najskôr zmrazia a zafixujú, čím sa vytvorí „škrupina“, ktorá bráni Centrálne časti buniek boli drvené a za studena fixované. Preto sa pri vykonávaní mikro-oblastnej analýzy X-line často zistí, že v strede väčších buniek sú ľadové kryštály. Aby sa tomu zabránilo, používa sa ako rozbité chladivo látka s bodom topenia vyšším ako má tekutý dusík, ale nižším ako má 806c. Existuje veľa takýchto látok, ale najlacnejší je koncentrovaný propán (bod varu - 42.120c, bod topenia - 187.10c, molekulová hmotnosť 44,1) a rýchlosť chladenia je najrýchlejšia. Jeho nevýhodou ale je, že je horľavý.
Biologický mikroskop dokáže umiestniť svalové vlákno na špeciálny stojan tak, že keď kontrakcia svalového vlákna dosiahne určitú fázu a je potrebné ho zafixovať, ihneď spustíte trysku na rozprašovanie tekutého propánu na svalové vlákno, aby sa uhasilo a zafixovalo. Potom boli svalové vlákna spolu s rámom vybraté a vložené do tekutého dusíka. Ak fixujete krvinky alebo izolované bunky, najskôr bunky koncentrujte centrifugáciou pri nízkej rýchlosti, preneste bunky do striebornej liekovky s dobrou tepelnou vodivosťou, vložte liekovku do tekutého propánu a zmrazte na fixáciu. Pri fixácii pankreasu potkanov v Hallovom laboratóriu boli dva oceľové bloky vopred ochladené tekutým héliom (alebo tekutým dusíkom) a dva medené bloky boli upevnené kliešťami a umiestnené na prednú a zadnú stranu pankreasu, aby sa uhasili a fixovali. pankreasu. Tkanivá alebo bunky môžu byť skladované v tekutom dusíku na dlhodobé skladovanie po ochladení a fixácii.
Biologická mikroskopia Okrem najuznávanejšej metódy zmrazených ultratenkých rezov je tu ďalšia technika nanášania, ktorú vedci používajú. Pridá sa látka, aby sa vytvoril sediment so zložkou, ktorá sa má analyzovať, aby sa pred analýzou imobilizovala, a sediment sa potom analyzuje. Napríklad ľudia často používajú oxalát a pyroantimonát na ukladanie vápnika do svalových buniek. Prvý z nich nie je dostatočne citlivý na nízku koncentráciu Ca v cytoplazme; pyroantimonát je citlivejší a môže v mozgu vytvárať elektrónové usadeniny s voľným Ca, ale pyroantimonát nie je kompatibilný so sodíkom, mangánom, báriom, železom. Depozity sa tiež tvoria a sú menej špecifické. Proces prípravy vzorky je podobný ako pri príprave vzoriek ultratenkých rezov z bežného transmisného elektrónového mikroskopu, rozdiel je v tom, že 3 percentá pyroantimoničnanu draselného (fosfátový tlmivý roztok, pH 7,6) boli fixované 6 hodín pred fixáciou a na ultratenkých rezoch zafarbených svalov, Čierne usadeniny boli pozorované v stredných čiarach pásov A a 2 každej sarkoméry a nezafarbené rezy sa použili na rôntgenovú mikroanalýzu. Diaminobenzidín tetrahydrochlorid (DAB) sa použil na vyzrážanie látok obsahujúcich hem atď. Kombináciu histochemickej precipitačnej reakcie a röntgenového mikrodiferenciačného mostíka možno zvážiť v laboratóriách, ktoré nemajú podmienky zmrazeného ultratenkého rezu. Semikvantitatívne možno vykonať podľa výšky píku prvkov, ktoré sa majú analyzovať
