Podrobne opíšte kroky výberu a metódy fluorescenčných sond pre konfokálnu mikroskopiu
Pri experimentoch s konfokálnymi mikroskopmi možno niektoré experimentálne indikátory detegovať pomocou autofluorescencie samotnej vzorky alebo exogénnych látok, ale väčšina testovaných látok nemá merateľnú fluorescenciu a je potrebné ich označiť fluorescenčnými sondami. Má merateľný fluorescenčný signál. Ako teda vybrať fluorescenčné sondy pre konfokálnu mikroskopiu?
1. Určte ukazovatele, ktoré sa majú testovať podľa účelu experimentu
Po určení detekčného indexu sa určí aj selekčný rozsah fluorescenčných sond. Je zrejmé, že výber, ktorá fluorescenčná sonda sa použije v experimente, závisí od účelu experimentu. Napríklad, ak je účelom experimentu študovať zmeny vápnikových iónov v kardiomyocytoch pri výskyte fibrilácie predsiení, možno určiť, že testovanou látkou sú ióny vápnika v kardiomyocytoch a rozsah výberu fluorescenčných sond je obmedzený na sondy vápnikových iónov, ktoré môžu označovať živé bunky. Ihla.
2. Určite rozsah dostupných fluorescenčných sond
V prípade nových experimentálnych látok alebo indikátorov, ak účelom experimentu nie je skúmanie nových fluorescenčných sond, môžete zvoliť použitie zrelých sond a metód označovania. Typ alebo rozsah fluorescenčných sond, ktoré môžu označovať látku, ktorá sa má testovať, je možné určiť vyhľadaním autoritatívnej literatúry alebo katalógov produktov známych spoločností zaoberajúcich sa reagenciami doma iv zahraničí.
3. Preskúmajte, či vlastnosti fluorescenčnej sondy spĺňajú požiadavky na prípravu fluorescenčných vzoriek
Charakteristiky fluorescenčných sond priamo ovplyvňujú značenie vzoriek a experimentálne výsledky. Preto pred výberom fluorescenčných sond a značením vzoriek v experimente je potrebné plne pochopiť ich fluorescenčné charakteristiky. Charakteristiky fluorescenčných sond, ktoré sa majú skúmať, zahŕňajú:
1. Reakčné charakteristiky svetelných sond a vzoriek
2. Citlivosť a intenzita fluorescencie fluorescenčných sond
3. Spektrálne vlastnosti vzoriek značených fluorescenčnými sondami
4. Stabilita fluorescencie
5. Interakcia medzi viacnásobnou fluorescenciou vo vzorke
