Stanovenie mikrobiálnej populácie - priama mikroskopická metóda počítania!
I. Požiadavky na účel
1, na objasnenie princípu počítania hematokritu.
2, Zvládnite metódu mikrobiálneho počítania pomocou hematokritovej platne.
II. Základné princípy
Metóda priameho počítania pod mikroskopom je malé množstvo suspenzie vzorky, ktorá sa má testovať na špeciálnom podložnom sklíčku s definovanou plochou a objemom (známe aj ako bakteriologické počítadlo), v mikroskope priamo počítanie jednoduchá, rýchla a intuitívna metóda. V súčasnosti sú domácimi a zahraničnými bežne používanými bakteriologickými počítadlami: doštička na počítanie krviniek, bakteriologické počítadlá Peteroff-Hauser a bakteriologické počítadlá Hawksley atď., ktoré možno použiť na kvasinky, baktérie, spóry plesní a iné suspenzie počítania, základný princíp je rovnaký. Posledné dva typy počítadiel majú celkový objem 0.02 mm3 po nasadení krycieho sklíčka a vzdialenosť medzi krycím sklíčkom a nosným plátkom je len 0,02 mm, takže menšie bunky ako napr. baktérie možno pozorovať a počítať pomocou objektívu s olejovou imerziou. Okrem použitia týchto počítadiel existuje aj metóda odhadu pomeru plochy náteru k ploche zorného poľa pozorovanej priamo pod mikroskopom, ktorá sa všeobecne používa na bakteriologické vyšetrenie kravského mlieka. Výhody metódy priameho mikroskopického počítania sú intuitívne, rýchle a ľahko ovládateľné. Nevýhodou tejto metódy však je, že výsledkom je väčšinou súčet mŕtvych a živých organizmov. Existuje niekoľko metód na prekonanie tejto nevýhody, ako je kombinácia mikrokomorovej kultúry zafarbenej živými baktériami (krátky čas) a pridanie inhibítorov cytokinézy na dosiahnutie účelu počítania iba živých organizmov.
Prevádzkové kroky
1, Príprava bakteriálnej suspenzie
Na prípravu bakteriálnej suspenzie pivovarských kvasníc s vhodnou koncentráciou použite sterilný fyziologický roztok.
2, zrkadlová počítacia komora
Pred pridaním vzoriek by sa mala najskôr skontrolovať počítacia komora počítacej dosky. Ak sú nejaké nečistoty, je potrebné ich pred počítaním vyčistiť a vyfúkať.
3, Pridávanie vzoriek
Vyčistite a osušte doštičku na počítanie krviniek pokrytú krycím sklíčkom a potom pomocou sterilnej kapilárnej byrety pretrepte suspenziu pivovarských kvasníc z okraja krycieho sklíčka, aby ste kvapli malú kvapku, aby sa bakteriálna kvapalina pozdĺž medzery kapilárnym prienikom do počítacia komora automaticky, vo všeobecnosti môže byť počítacia komora naplnená bakteriálnou kvapalinou. Pri odbere vzoriek treba bakteriálny roztok najskôr dobre pretrepať; pri pridávaní vzoriek by počítacia komora nemala mať vzduchové bubliny.
4, počítanie pod mikroskopom
Po pridaní vzorky ju nechajte 5 minút odpočívať, potom vložte doštičku na počítanie krviniek na nosič mikroskopu, najskôr nájdite umiestnenie počítacej komôrky s malým zväčšením a potom ju zmeňte na veľké zväčšenie na počítanie. Intenzitu svetla mikroskopu vhodne upravte, pri mikroskope s reflektorom treba dbať aj na to, aby svetlo nemalo byť vychýlené na jednu stranu, inak zorné pole nie je jednoduché jazykom jasné počítacie komory mriežka čiara, príp. vidieť iba zvislú čiaru alebo iba vodorovnú čiaru. Ak sa pred počítaním zistí, že bakteriálna tekutina je príliš hustá alebo príliš riedka, je potrebné pred počítaním znovu upraviť riedenie. Vhodné sú všeobecné požiadavky na riedenie vzorky približne 5 až 10 baktérií v každej bunke. Pre každú počítaciu komoru sa na počítanie vyberú organizmy v 5 stredných oddeleniach (4 rohy a jeden stredný priestor v strede). Organizmy nachádzajúce sa na čiarach mriežky sa zvyčajne počítajú iba na hornej a pravej čiare. V prípade pučania kvasiniek, keď pučiace telo dosiahne polovicu veľkosti materskej bunky, sa počíta ako dva organizmy. Počítanie vzorky z dvoch počítacích komôr v priemernej hodnote na výpočet obsahu baktérií vo vzorke.
5. Čistenie hematokritovej platne
Po použití opláchnite doštičku na počítanie krviniek vodou pod tečúcou vodou, na umývanie a kefovanie nepoužívajte tvrdé predmety, osušte ju sami alebo ju po umytí vyfúkajte fénom. Mikroskopicky skontrolujte platňu, aby ste zistili, či sa v každom oddelení nenachádzajú nejaké zvyškové organizmy alebo iné zrazeniny. Ak nie je čistý, umývanie sa musí opakovať, kým nebude čisté.
