Stanovenie počtu mikroorganizmov-Mikroskopická metóda priameho počítania!
Rast bakteriálnej populácie sa prejavuje zvýšením počtu buniek alebo zvýšením bunkového materiálu. Metódy na stanovenie počtu buniek zahŕňajú priame mikroskopické počítanie, počítanie na platni, odhad zákalu spektrofotometrom, najpravdepodobnejší počet MPN a membránovú filtráciu. (membránová filtrácia) atď. Metódy merania bunkových substancií zahŕňajú stanovenie suchej hmotnosti buniek, stanovenie určitých zložiek buniek, ako je obsah dusíka, obsah RNA a DNA, a stanovenie produktov metabolitov. Stručne povedané, existuje veľa metód na meranie rastu mikróbov, z ktorých každá má svoje výhody a nevýhody. Metóda by mala byť zvolená podľa špecifických požiadaviek práce. Tento experiment predstavuje hlavne metódu priameho počítania mikroskopom, ktorá sa bežne používa vo výrobe a vedeckovýskumnej práci.
1. Požiadavky na účel
1. Objasnite princíp počítania pomocou dosky na počítanie krviniek.
2. Osvojiť si metódu počítania mikroorganizmov pomocou dosky na počítanie krviniek.
2. Základné princípy
Metóda priameho počítania pod mikroskopom je jednoduchá, rýchla a intuitívna metóda, pri ktorej sa malé množstvo suspenzie testovanej vzorky umiestni na špeciálne sklíčko so stanovenou plochou a objemom (nazývané aj bakteriometer) a spočíta sa priamo pod mikroskopom. Metódy. V súčasnosti sú bežne používané bakteriometre doma aj v zahraničí: hemocytometer, Peteroff-Hauser bakteriometer, Hawksleyho bakteriometer atď. Všetky sa dajú použiť na počítanie kvasiniek, baktérií, spór plesní a iných suspenzií a základné princípy sú rovnaké. Posledné dve počítadlá baktérií majú celkový objem 0.02 mm3 po zakrytí krycím sklom a vzdialenosť medzi krycím sklom a podložným sklíčkom je len 0,02 mm. Preto sa šošovka objektívu s olejovou imerziou môže použiť na pozorovanie a detekciu menších buniek, ako sú baktérie. počítať. Okrem použitia týchto bakteriometrov existuje aj metóda odhadu, ktorá priamo pozoruje pomer plochy náteru k ploche zorného poľa pod mikroskopom. Táto metóda sa všeobecne používa na bakteriologické vyšetrenie mlieka. Výhody metódy priameho počítania mikroskopu spočívajú v tom, že je intuitívna, rýchla a jednoduchá na ovládanie. Nevýhodou tejto metódy však je, že nameraným výsledkom je väčšinou súčet mŕtvych baktérií a živých baktérií. V súčasnosti existujú niektoré metódy na prekonanie tohto nedostatku, ako je kombinovanie mikrokomorovej kultúry farbením životaschopnými baktériami (krátky čas) a pridanie inhibítorov bunkového delenia na dosiahnutie účelu počítania iba životaschopných baktérií.
Tento experiment používa hemocytometer ako príklad na uskutočnenie priameho počítania pod mikroskopom. Informácie o použití ďalších dvoch bakteriometrov nájdete v pokynoch každého výrobcu. Priame počítanie pod mikroskopom pomocou hemocytometra je bežne používanou metódou mikrobiálneho počítania. Počítacia doska je špeciálna šmykľavka so štyrmi drážkami, ktoré tvoria tri plošiny; širšia plošina v strede je rozdelená na dve polovice krátkou horizontálnou drážkou a na každej strane plošiny je mriežková mriežka. Každá štvorcová sieť je rozdelená na deväť veľkých štvorcov a veľký štvorec v strede je miestnosť na počítanie. Štruktúra dosky na počítanie krviniek je znázornená na obrázku {{0}}. Vo všeobecnosti existujú dve špecifikácie pre stupnicu počítacej komory. Jeden je veľký štvorec rozdelený na 25 stredných štvorcov a každý stredný štvorec je rozdelený na 16 malých štvorcov (obrázok 15-2); druhý je veľké námestie. Štvorcová sieť je rozdelená na 16 stredných štvorcov a každý stredný štvorec je rozdelený na 25 malých štvorcov. Bez ohľadu na to, o aký druh počítacej dosky ide, v každom veľkom poli je 400 malých políčok. Dĺžka strany každého veľkého štvorca je lmm, potom plocha každého veľkého štvorca je lmm2. Po zakrytí krycieho sklíčka je výška medzi krycím sklíčkom a podložným sklíčkom 0,1 mm, takže objem počítacej komory je 0,1 mm3 (jedna desaťtisícina mililitra). Obrázok 15-1 Štruktúra dosky na počítanie krviniek (1) Obrázok 15-2 Štruktúra dosky na počítanie krviniek (2) A. Pohľad spredu; B. Pozdĺžny rez; zväčšená štvorcová mriežka, veľký štvorec v strede je počítacia komora 1. Krvné bunky Počítacia doska; 2. Krycie sklíčko; 3. Pri počítaní v počítacej komore zvyčajne spočítajte celkový počet baktérií v piatich štvorcoch, potom nájdite priemernú hodnotu každého štvorca a potom vynásobte 25 alebo 16, aby ste dostali Celkový počet baktérií vo veľkom štvorci sa potom prevedie do celkového počtu baktérií v 1ml bakteriálneho roztoku. Predpokladajme, že celkový počet baktérií v piatich stredných štvorcoch je A a riediaci faktor bakteriálneho roztoku je B. Ak ide o počítaciu doštičku s 25 strednými štvorcami, potom celkový počet baktérií v 1 ml bakteriálneho roztoku {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (kusy) Rovnakým spôsobom, ak ide o počítaciu doštičku so 16 štvorcami, celkový počet baktérií v 1 ml bakteriálneho roztoku {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (kusy),,
