Rozdiel medzi fluorescenčným mikroskopom a laserovým konfokálnym mikroskopom
fluorescenčný mikroskop
1. Fluorescenčný mikroskop používa ultrafialové svetlo ako zdroj svetla, ktoré sa používa na ožarovanie detekovaného objektu, aby vyžaroval fluorescenciu, a potom pozoruje tvar a polohu objektu pod mikroskopom. Fluorescenčný mikroskop sa používa na štúdium absorpcie, transportu, distribúcie a umiestnenia chemických látok v bunkách. Niektoré látky v bunkách, ako napríklad chlorofyl, môžu po ožiarení ultrafialovými lúčmi fluoreskovať; Iné látky nemôžu samy fluoreskovať, ale môžu fluoreskovať po farbení fluorescenčnými farbivami alebo fluorescenčnými protilátkami a ožiarení ultrafialovými lúčmi. Fluorescenčný mikroskop je jedným z nástrojov kvalitatívneho a kvantitatívneho výskumu týchto látok.
2, princíp fluorescenčného mikroskopu:
(a) Svetelný zdroj: Svetelný zdroj vyžaruje svetlo rôznych vlnových dĺžok (od ultrafialového po infračervené).
(b) Zdroj svetla s excitačným filtrom: prenáša svetlo so špecifickou vlnovou dĺžkou, ktorá môže spôsobiť fluorescenciu vzorky, pričom blokuje svetlo, ktoré je na excitáciu fluorescencie zbytočné.
(c) Fluorescenčné vzorky: vo všeobecnosti zafarbené fluorescenčnými pigmentmi.
(d) Blokovací filter: blokuje excitačné svetlo neabsorbované vzorkou na selektívny prenos fluorescencie a niektoré vlnové dĺžky vo fluorescencii sú tiež selektívne prenášané. Mikroskop, ktorý využíva ultrafialové svetlo ako zdroj svetla, aby ožiarený objekt vyžaroval fluorescenciu. Elektrónový mikroskop prvýkrát zostavili Knohl a Ha Roska v Berlíne v roku 1931. Tento mikroskop používa vysokorýchlostný elektrónový lúč namiesto svetelného lúča. Pretože vlnová dĺžka toku elektrónov je oveľa kratšia ako vlnová dĺžka svetelnej vlny, zväčšenie elektrónového mikroskopu môže dosiahnuť 800 tisíckrát a minimálny limit rozlíšenia je 0,2 nanometra. Rastrovací elektrónový mikroskop, ktorý sa začal používať v roku 1963, dokáže ľuďom prinútiť vidieť drobné štruktúry na povrchu predmetov.
3. Rozsah použitia: používa sa na zväčšenie obrazu drobných predmetov. Všeobecne sa používa na pozorovanie biológie, medicíny a mikroskopických častíc.
Konfokálny mikroskop
1. Konfokálny mikroskop pridáva na optickú dráhu odrazeného svetla semireflexnú pološošovku, ktorá láme odrazené svetlo, ktoré prešlo šošovkou do iných smerov. V jeho ohnisku sa nachádza ozvučnica s dierkou a dierka sa nachádza v ohnisku. Za ozvučnicou je trubica fotonásobiča. Možno si predstaviť, že odrazené svetlo pred a po zaostrení detekčného svetla prechádza týmto konfokálnym systémom a nebude zaostrené na malý otvor, ale bude blokované prepážkou. Takže fotometer meria intenzitu odrazeného svetla v ohnisku.
2. Princíp: Tradičný optický mikroskop využíva zdroj poľného svetla a obraz každého bodu na vzorke bude rušený difrakciou alebo rozptýleným svetlom susedných bodov; Laserový skenovací konfokálny mikroskop skenuje každý bod ohniskovej roviny vo vzorke pomocou bodového svetelného zdroja tvoreného laserovým lúčom prechádzajúcim cez osvetľovaciu dierku. Ožiarený bod na vzorke sa zobrazí v detekčnej dierke, ktorá je po detekcii dierky prijímaná bod po bode alebo riadok po bode pomocou fotonásobiča (PMT) alebo zariadenia so studenou väzbou (cCCD) a rýchlo sa vytvorí fluorescenčný obraz. obrazovke monitora počítača. Osvetľovacia dierka a detekčná dierka sú konjugované vzhľadom na ohniskovú rovinu šošovky objektívu a body v ohniskovej rovine sa zameriavajú na osvetľovaciu dierku a vyžarovaciu dierku súčasne a body mimo ohniskovej roviny nebudú byť zobrazené v detekčnej dierke, takže získaný konfokálny obraz je optickým prierezom vzorky, ktorý prekoná defekt rozmazaného obrazu bežného mikroskopu.
3. Oblasti použitia: zahŕňajúce medicínu, výskum zvierat a rastlín, biochémiu, bakteriológiu, bunkovú biológiu, tkanivá a embryo, potravinárstvo, genetiku, farmakológiu, fyziológiu, optiku, patológiu, botaniku, neurovedu, morskú biológiu, vedu o materiáloch, elektronickú vedu, mechanika, ropná geológia a mineralógia.
