Rozdiel medzi fluorescenčným mikroskopom a bežným optickým mikroskopom
Rozdiel medzi fluorescenčným mikroskopom a bežným optickým mikroskopom, fluorescenčným mikroskopom a bežným optickým mikroskopom je odlišný, na pozorovanie preparátu nie je potrebné osvetlenie bežného svetelného zdroja, ale použitie určitej vlnovej dĺžky svetla (zvyčajne ultrafialové, modrofialové) excitácia preparátu pod mikroskopom vo fluorescenčnom materiáli tak, že vyžaruje fluorescenčné svetlo, takže úlohou fluorescenčného mikroskopu v zdroji svetla nie je priame osvetlenie, ale ako druh stimulácie preparátov fluorescencie vnútorného svetla Zdrojom fluorescenčného mikroskopu nie je priame osvetlenie, ale ako zdroj energie na stimuláciu fluorescenčnej látky vo vnútri vzorky. Dôvod, prečo môžeme preparát pozorovať, nie je spôsobený osvetlením svetelného zdroja, ale fluorescenčným javom prezentovaným fluorescenčnou látkou vo vzorke po absorpcii excitovanej svetelnej energie. Je vidieť, že vlastnosti fluorescenčného mikroskopu spočívajú najmä v tom, že jeho svetelný zdroj môže dodávať veľké množstvo špecifického rozsahu vlnových dĺžok excitačného svetla, takže fluorescenčné látky v skúmanej vzorke môžu získať potrebnú intenzitu excitačného svetla. Zároveň musí mať fluorescenčný mikroskop zodpovedajúci filtračný systém. Fluorescenčný mikroskop je základným nástrojom pre **fluorescenčnú histochémiu. Skladá sa z ultravysokotlakového svetelného zdroja, filtračného systému (vrátane excitačnej a supresívnej filtračnej platne), optického systému a fotografického systému a ďalších hlavných komponentov, je použitie určitej vlnovej dĺžky svetla na stimuláciu vzorky k vyžarovaniu fluorescencie.
1. spôsob excitácie fluorescencie: podľa rozsahu vlnových dĺžok svetla sa delí na metódu UV excitácie (pomocou ultrafialového osvetlenia) a metódu BV excitácie (pomocou modrého fialového svetla) dva druhy metódy UV excitácie je kratšia ako 400nm v blízkosti ultrafialového svetla pre excitácia. Pri tejto metóde nie je viditeľné žiadne excitačné svetlo, takže pozorovaná fluorescencia ukazuje inherentnú fluorescenciu farbiva a je ľahké rozlíšiť špecifickú fluorescenciu na vzorke od samofluorescencie tkaniva pozadia.
2. Metóda BV excitácie: Metóda je zameraná na 404nm, 434nm od ultrafialového po modré svetlo na excitáciu. Táto metóda využíva modré svetlo na ožarovanie preparátu, takže hraničný filter fluorescenčného pozorovacieho systému musí používať filter, ktorý dokáže úplne blokovať modré svetlo a úplne prejsť požadovanou zelenou a žltou fluorescenciou. Fluorescenčné pigmenty pre fluorescenčnú protilátkovú metódu. Pretože vlnová dĺžka maximálnej absorpcie excitačného svetla a vlnová dĺžka maximálnej emisie fluorescencie sú blízko seba, filtre používané v BV excitačnej metóde musia byť filtre s ostrým medzným rozsahom. Táto metóda využíva modré svetlo ako excitačné svetlo, takže absorpčná účinnosť fluorochrómu je vyššia a možno získať jasnejší obraz. Nevýhodou je, že fluorescenciu pod 500 nm nevidno a nad 500 nm sa celý obraz javí ako žltý. Pri fluorescenčnej protilátkovej metóde sa väčšina špecificity posudzuje podľa farby jedinečnej pre fluorochróm, takže nevýhody BV excitačnej metódy opísanej vyššie majú tendenciu byť extrémne vplyvné pri diskusii o jemnej špecifickosti.
