Rozdiely medzi fluorescenčnou mikroskopiou a konfokálnou mikroskopiou
fluorescenčný mikroskop
1. Fluorescenčný mikroskop používa ultrafialové svetlo ako zdroj svetla na ožarovanie kontrolovaného objektu, čo spôsobuje, že emituje fluorescenciu, a potom pozoruje tvar a polohu objektu pod mikroskopom. Fluorescenčná mikroskopia sa používa na štúdium absorpcie, transportu, distribúcie a lokalizácie látok v bunkách. Niektoré látky v bunkách, ako je chlorofyl, sa môžu pri vystavení ultrafialovému žiareniu fluorestovať; Existujú aj niektoré látky, ktoré nemôžu emitovať fluorescenciu sami, ale môžu tiež emitovať fluorescenciu, ak sa zafarbia fluorescenčnými farbivami alebo fluorescenčnými protilátkami a ožiarené ultrafialovým svetlom. Fluorescenčná mikroskopia je jedným z nástrojov pre kvalitatívny a kvantitatívny výskum týchto látok.
2. Princíp fluorescenčného mikroskopu:
(A) Zdroj svetla: Zdroj svetla vyžaruje svetlo rôznych vlnových dĺžok (od ultrafialového po infračervený).
(B) Svetlo excitačného filtra: Prenášanie svetla špecifickej vlnovej dĺžky, ktorá môže spôsobiť fluorescenciu vo vzorke, zatiaľ čo blokuje svetlo, ktoré je zbytočné pre vzrušujúcu fluorescenciu.
C) Fluorescenčné vzorky: zvyčajne zafarbené fluorescenčnými pigmentmi.
(D) Blokovací filter: Selektívne prenáša fluorescenciu blokovaním excitačného svetla, ktoré nie je absorbované vzorkou, a niektoré vlnové dĺžky vo fluorescencii sa tiež selektívne prenášajú. Mikroskop, ktorý používa ako zdroj svetla ultrafialové svetlo, aby osvetlený objekt emitoval fluorescenciu. Elektrónový mikroskop bol prvýkrát zostavený Knorr a Haruska v Berlíne v Nemecku v roku 1931. Tento mikroskop používa namiesto ľahkých lúčov vysokorýchlostný elektrónový lúče. V dôsledku oveľa kratšej vlnovej dĺžky prietoku elektrónov v porovnaní s ľahkými vlnami môže zväčšenie elektrónového mikroskopu dosiahnuť 8 0 0000 krát, s minimálnym limitom rozlíšenia 0,2 nanometrov. Skenovací elektrónový mikroskop, ktorý sa prvýkrát použil v roku 1963, umožňuje ľuďom vidieť malé štruktúry na povrchu objektov.
3. Rozsah aplikácie: Používa sa na zväčšenie obrázkov malých objektov. Všeobecne sa používa na pozorovania biológie, medicíny, mikroskopických častíc atď.
konfokálny mikroskop
1. Konfokálny mikroskop pridáva polo reflexnú polovicu šošovky do odrazenej svetelnej dráhy, ktorá odkláňa odrazené svetlo, ktoré prešlo objektívom v iných smeroch. Vo svojom ohniskovom bode sa nachádza v ohniskovom bode usmerňovacia dierka a za usmerňovacou trubicou je fotomultipérová trubica. Je možné si predstaviť, že odrazené svetlo pred a po detekčnom svetle sa nemožno zamerať na malý otvor cez tento konfokálny systém a bude blokované usmerňovacími prostriedkami. Fotometer teda meria odrazenú intenzitu svetla v ohniskovom bode.
2. Princíp: Tradičné optické mikroskopy používajú zdroje svetla poľa a obraz každého bodu na vzorke je ovplyvnený difrakciou alebo rozptýleným svetlom zo susedných bodov; Konfokálny mikroskop laserového skenovania používa laserový lúč na osvetlenie dierky a vytvorenie zdroja bodového svetla na skenovanie každého bodu na ohniskovej rovine vzorky. Osvetlený bod na vzorke sa zobrazuje v detekčnom dierke a je prijatý bodom alebo čiarami fotomultiplerovou trubicou (PMT) alebo studeným spojovacím zariadením (CCCD) po zistení dierky, čím sa na obrazovke monitorov monitora počítača rýchlo vytvoril fluorescenčný obraz. Osvetľovacia dierka a detekčná dierka sú konjugované v porovnaní s ohniskovou rovinou objektívnej šošovky. Body na ohniskovej rovine sa súčasne zameriavajú na osvetľovaciu dierku a emisnú dierku a body mimo ohniskovej roviny sa nezobrazia pri detekčnej dierke. Výsledný konfokálny obraz je optickým prierezom vzorky, ktorý prekonáva nevýhodu rozmazaných obrazov vo všeobecných mikroskopách.
