Rozšírenie výhod viacshotónovej laserovej skenovacej mikroskopie o zahrnutie
Laserový skenovací multihotónový mikroskop je významným zlepšením optickej mikroskopie, ktorá sa prejavuje hlavne v schopnosti pozorovať hlboké štruktúry živých buniek, fixných buniek a tkanív, a získať jasné a ostré viacvrstvové štruktúry z-roviny, menovite optické plátky, ktoré sa môžu použiť na konštrukciu trojrozmerných tuhých štruktúr vzoriek vzoriek. Konfokálny mikroskop používa laserový zdroj svetla, ktorý sa rozširuje na vyplnenie celej ohniskovej roviny objektívnej šošovky, a potom sa konvergoval na veľmi malé body na ohniskovej rovine vzorky cez systém objektívu objektívnej šošovky. Podľa číselnej clony objektívnej šošovky je priemer jasného bodu osvetlenia o 0. Veľkosť konfokálneho bodu je určená návrhom mikroskopu, laserovou vlnovou dĺžkou, objektívnymi charakteristikami, nastaveniami stavu jednotky skenovania a vlastnosťami vzoriek. Rozsah osvetlenia a hĺbka poľného mikroskopu sú veľké, zatiaľ čo osvetlenie konfokálneho mikroskopu je zamerané na ohnisko na ohniskovej rovine. Základnou výhodou konfokálnej mikroskopie je to, že môže vykonávať jemné optické rezy na hrubých fluorescenčných vzorkách (až 5 0 μm alebo viac), s hrúbkou približne 0,5 až 1,5 μm. Séria obrazov optických rezov je možné získať presunutím vzorky nahor a nadol pomocou krokového motora mikroskopu z osi Z. Zhromažďovanie informácií o obraze je riadené v rovine * * bez rušenia zo signálov emitovaných z iných pozícií na vzorke. Po odstránení vplyvu fluorescencie pozadia a zvýšení pomeru signálu k šumu sa kontrast a rozlíšenie konfokálnych obrazov významne zlepší v porovnaní s tradičnými fluorescenčnými snímkami osvetlenia poľa. V mnohých vzorkách sa zložité štrukturálne komponenty preplietajú, aby sa vytvorili zložité systémy, ale akonáhle je možné zhromaždiť dostatok optických sekcií, môžeme na ich rekonštrukciu v troch rozmeroch použiť softvér. Táto experimentálna metóda sa široko používa v biologickom výskume na objasnenie komplexných štrukturálnych a funkčných vzťahov medzi bunkami alebo tkanivami.
