Rozdiely a vlastnosti fluorescenčného mikroskopu a bežného optického mikroskopu
Fluorescenčný mikroskop a bežný optický mikroskop sa líšia, pozorovanie vzorky nie je možné osvetlením bežného svetelného zdroja, ale použitím určitej vlnovej dĺžky svetla (zvyčajne ultrafialového, modrofialového svetla) excitáciou fluorescenčného materiálu vo vzorke. pod mikroskopom, takže fluorescencia svetelného zdroja fluorescenčného mikroskopu nehrá priame osvetlenie, ale ako druh excitácie fluorescenčného materiálu vo vzorke zdroja energie. Dôvod, prečo môžeme preparát pozorovať, nie je spôsobený osvetlením svetelného zdroja, ale fluorescenčným javom prezentovaným fluorescenčným materiálom vo vzorke po absorpcii svetelnej energie excitácie. Je vidieť, že vlastnosti fluorescenčného mikroskopu, hlavne jeho svetelného zdroja, môžu dodať veľké množstvo špecifických vlnových dĺžok excitačného svetla, takže fluorescenčný materiál v skúmanej vzorke môže získať potrebnú intenzitu excitačného svetla. Zároveň musí mať fluorescenčný mikroskop zodpovedajúci filtračný systém. Fluorescenčný mikroskop je základným nástrojom fluorescenčnej histochémie. Skladá sa z ultravysokotlakového svetelného zdroja, filtračného systému (vrátane excitačnej a supresívnej filtračnej platne), optického systému a fotografického systému a ďalších hlavných komponentov, je použitie určitej vlnovej dĺžky svetla na stimuláciu vzorky k vyžarovaniu fluorescencie.
1. spôsob excitácie fluorescencie: podľa rozsahu vlnových dĺžok svetla sa delí na metódu UV excitácie (pomocou ultrafialového osvetlenia) a metódu BV excitácie (pomocou modrého fialového svetla) dva druhy metódy UV excitácie je kratšia ako 400nm v blízkosti ultrafialového svetla pre excitácia. Pri tejto metóde nie je viditeľné žiadne excitačné svetlo, takže pozorovaná fluorescencia ukazuje vlastnú fluorescenciu farbiva a je ľahké rozlíšiť špecifickú fluorescenciu na vzorke od samofluorescencie tkaniva pozadia.
2. Metóda BV excitácie: Metóda je zameraná na 404nm, 434nm od ultrafialového po modré svetlo na excitáciu. Táto metóda využíva na ožarovanie preparátu modré svetlo, takže medzný filter systému na pozorovanie fluorescencie musí používať filter, ktorý dokáže úplne blokovať modré svetlo a dokáže primerane prepustiť požadovanú zelenú a žltú fluorescenciu. Fluorescenčné pigmenty pre fluorescenčnú protilátkovú metódu. Pretože vlnová dĺžka maximálnej absorpcie excitačného svetla a vlnová dĺžka maximálnej emisie fluorescencie sú blízko seba, filtre používané v BV excitačnej metóde musia byť filtre s ostrým medzným rozsahom. Táto metóda využíva modré svetlo ako excitačné svetlo, takže absorpčná účinnosť fluorochrómu je vyššia a možno získať jasnejší obraz. Nevýhodou je, že fluorescenciu pod 500 nm nevidno a nad 500 nm sa celý obraz javí žltý. Vo fluorescenčnej protilátkovej metóde sa väčšina špecificity posudzuje podľa jedinečnej farby fluorochrómu, takže nevýhody BV excitačnej metódy opísanej vyššie majú tendenciu byť extrémne vplyvné pri diskusii o jemnej špecifickosti.
