Fluorescenčné mikroskopy možno rozdeliť do dvoch typov podľa princípu svetelnej dráhy:
1. Transmisný fluorescenčný mikroskop
V starších fluorescenčných mikroskopoch prechádza zdroj excitačného svetla cez materiál vzorky cez kondenzátor, aby sa vybudila fluorescencia. Výhodou je, že fluorescencia je silná pri malom zväčšení, nevýhodou však je, že fluorescencia s rastúcim zväčšením slabne. Je teda vhodný len na pozorovanie väčších vzorových materiálov.
2.Epifluorescenčná mikroskopia
Budiace svetlo dopadá zo šošovky objektívu na povrch vzorky, tj na zber fluorescencie sa používa rovnaká šošovka objektívu ako osvetľovací kondenzor a šošovka objektívu.
K optickej dráhe, ktorá je v uhle 45o k optickej osi, je potrebné pridať dichroický rozdeľovač lúčov (dichroické zrkadlo). Budiace svetlo sa odráža do šošovky objektívu a sústreďuje sa na vzorku. Fluorescencia generovaná vzorkou sa odráža od povrchu šošovky objektívu a krytu. Budiace svetlo odrazené na povrchu podložného sklíčka vstupuje súčasne do šošovky objektívu a vracia sa do dichroického rozdeľovača lúčov, aby oddelilo excitačné svetlo a fluorescenciu. Zvyšné excitačné svetlo je potom absorbované blokovacím filtrom. Ak použijete rôzne kombinované vložky excitačného filtra/dvojfarebného rozdeľovača lúča/blokovacieho filtra, môžete splniť potreby rôznych produktov fluorescenčnej reakcie.
Výhodou tohto typu fluorescenčného mikroskopu je, že zorné pole je rovnomerne osvetlené, obraz je jasný a čím väčšie zväčšenie, tým silnejšia je fluorescencia.
Aké sú hlavné kategórie optických mikroskopov?
1. Bežný optický mikroskop
Bežné optické mikroskopy sa skladajú hlavne z nasledujúcich častí: osvetľovací systém, ktorý zahŕňa zdroj svetla a kondenzor; optický zväčšovací systém, ktorý sa skladá zo šošovky objektívu a okuláru. Je to najkritickejšia časť mikroskopu a je navrhnutá tak, aby sa zabránilo nadmernej sférickej a chromatickej aberácii, okulár aj šošovka objektívu sú zložené zo zložitých skupín šošoviek.
2. Laserový konfokálny rastrovací mikroskop
Laserový konfokálny skenovací mikroskop znie veľmi špičkovo a komplikovane. V skutočnosti jednoducho používa laser ako skenovací svetelný zdroj na rýchle skenovanie a zobrazovanie objektov bod po bode, riadok po riadku a povrch po povrchu.
Na základe kratšej vlnovej dĺžky laserového lúča je samotný lúč veľmi tenký, čo určuje, že konfokálny laserový rastrovací mikroskop má vysoké rozlíšenie, ktoré je asi trojnásobné v porovnaní s bežným optickým mikroskopom. Tento typ mikroskopu sa používa na pozorovanie morfológie buniek a kvantitatívnu analýzu intracelulárnych biochemických zložiek a meranie morfológie buniek.
3. Mikroskop v tmavom poli
V strede kondenzora mikroskopu s tmavým poľom sa nachádza svetelná platňa, ktorá zabraňuje priamemu vstupu osvetľovacieho svetla do šošovky objektívu. Do šošovky objektívu môže vstúpiť len svetlo odrazené a ohýbané vzorkou. Preto je pozadie zorného poľa čierne a okraje objektov svetlé.
