Ako sa fluorescenčná mikroskopia líši od laserovej konfokálnej mikroskopie
Fluorescenčný mikroskop
1, fluorescenčný mikroskop má používať ultrafialové svetlo ako zdroj svetla, ktorý sa používa na ožarovanie skúmaného objektu, aby vyžaroval fluorescenciu, a potom pozoruje tvar objektu a jeho umiestnenie pod mikroskopom. Fluorescenčný mikroskop sa používa na štúdium absorpcie, transportu, distribúcie a lokalizácie chemických látok v bunkách. Niektoré látky v bunke, ako napríklad chlorofyl, môžu po ožiarení ultrafialovým svetlom fluoreskovať; sú látky, ktoré samé o sebe fluoreskovať nedokážu, ale ak sú zafarbené fluorescenčnými farbivami alebo fluorescenčnými protilátkami, môžu fluoreskovať aj po ožiarení ultrafialovým svetlom a fluorescenčná mikroskopia je jedným z nástrojov na kvalitatívny a kvantitatívny výskum tohto druhu látok.
2, princíp fluorescenčného mikroskopu:
(A) svetelný zdroj: svetelný zdroj vyžaruje rôzne vlnové dĺžky svetla (od ultrafialového po infračervené).
(B) zdroj excitačného filtra: cez vzorku môže produkovať fluorescenciu špecifickej vlnovej dĺžky svetla, pričom blokuje excitáciu fluorescenčného zbytočného svetla.
(C) Fluorescenčná vzorka: vo všeobecnosti zafarbená fluorochrómom.
(D) Blokovacie filtre: blokujú excitačné svetlo, ktoré nie je absorbované vzorkou, aby sa selektívne prenášala fluorescencia a niektoré vlnové dĺžky vo fluorescencii sú tiež selektívne prenášané. Mikroskop, ktorý využíva ultrafialové svetlo ako zdroj svetla, aby ožiarený objekt fluoreskoval. Elektrónový mikroskop bol prvýkrát zostavený v roku 1931 v Berlíne v Nemecku firmou Knorr a Haroska. Tento mikroskop používa vysokorýchlostný elektrónový lúč namiesto svetelného lúča. Pretože vlnová dĺžka prúdu elektrónov je oveľa kratšia ako svetelná vlna, zväčšenie elektrónového mikroskopu môže byť až 800,000-krát, rozlíšenie minimálneho limitu 0,2 nanometrov . 1963 začal používať rastrovací elektrónový mikroskop, ktorý možno vidieť na povrchu drobnej štruktúry objektu.
3, rozsah použitia: používa sa na zväčšenie obrazu malých predmetov. Všeobecne sa používa v biológii, medicíne, mikroskopických časticiach a iných pozorovaniach.
Konfokálny mikroskop
1, konfokálny mikroskop v odraze svetla na vozovke plus poloodrazová pološošovka, bude cez šošovku odrazeného svetla zložená do iných smerov, v ohnisku na prepážke s dierkou, otvor sa nachádza v ohnisko, za ozvučnicou je trubica fotonásobiča. Možno si predstaviť, že odrazené svetlo pred a za ohniskom svetla detektora cez túto sadu konfokálneho systému nebude schopné zaostriť na malý otvor, bude blokované prepážkou. Takže fotometer meria intenzitu odrazeného svetla v ohnisku.
2, princíp: tradičný optický mikroskop využíva poľný svetelný zdroj, obraz každého bodu na preparáte bude rušený difrakciou alebo rozptylom svetla zo susedných bodov; laserový skenovací konfokálny mikroskop využíva laserový lúč cez osvetľovaciu dierku na vytvorenie bodového zdroja svetla na preparáte v ohniskovej rovine skenovania každého bodu na preparáte, pri detekcii dierky pri zobrazovaní je preparát ožiarený , detekciou dierky za fotonásobičom (PMT) alebo studeným elektroväzbovým zariadením (cCCD) bod po bode alebo bod po bode alebo bod po bode sa intenzita svetla meria fotometrom. cCCD) prijíma bod po bode alebo riadok po riadku a rýchlo vytvára fluorescenčný obraz na obrazovke monitora počítača. Osvetľovacia dierka a detekčná dierka vzhľadom na ohniskovú rovinu šošovky objektívu sú združené, bod na ohniskovej rovine sa súčasne zameriava na osvetľovaciu dierku a emisnú dierku, bod mimo ohniskovej roviny nebude v detekčnej dierke pri zobrazovanie, takže konfokálny obraz je vzorkou optického prierezu, čím sa prekonávajú nedostatky rozmazaných obrazov bežných mikroskopov.
3,Aplikačné oblasti: medicína, výskum zvierat a rastlín, biochémia, bakteriológia, bunková biológia, tkanivová embryológia, potravinárstvo, genetika, farmakológia, fyziológia, optika, patológia, botanika, neuroveda, morská biológia, veda o materiáloch, elektronická veda, mechanika, ropná geológia, mineralógia.
