Vylepšené výhody laserovej skenovacej multifotónovej mikroskopie
Laserová skenovacia multifotónová mikroskopia je hlavným vylepšením optickej mikroskopie, hlavne na pozorovanie hlbokej štruktúry živých buniek, fixovaných buniek a tkanív a môže získať jasné a ostré viacvrstvové štruktúry v rovine Z, to znamená optické rezy, a môže vytvoriť Trojrozmerná pevná štruktúra vzorky. Konfokálny mikroskop využíva zdroj laserového svetla, ktorý je rozšírený tak, aby vyplnil celú zadnú ohniskovú rovinu šošovky objektívu, a potom sa zbieha do veľmi malého bodu v ohniskovej rovine preparátu cez systém šošoviek šošovky objektívu. V závislosti od numerickej apertúry šošovky objektívu je priemer najjasnejšieho bodu osvetlenia približne 0,25 ~ 0,8 μm a hĺbka je približne 0,5 ~ 1,5 μm. Veľkosť konfokálnej škvrny závisí od konštrukcie mikroskopu, vlnovej dĺžky lasera, vlastností šošovky objektívu, nastavenia stavu snímacej jednotky a charakteru preparátu. Poľné mikroskopy majú veľký rozsah osvetlenia a veľkú hĺbku osvetlenia, zatiaľ čo konfokálne mikroskopy majú osvetlenie sústredené v ohnisku v ohniskovej rovine. Najzákladnejšou výhodou konfokálnej mikroskopie je, že dokáže vykonávať jemné optické rezy hrubých fluorescenčných vzoriek (až do 50 μm alebo viac) s hrúbkou približne 0,5 až 1,5 μm. Sériu obrazov optických rezov možno získať pohybom preparátu nahor a nadol pomocou krokového motora osi Z mikroskopu. Získavanie obrazových informácií je riadené v rovine a nebude rušené signálmi z iných miest na vzorke. Po odstránení efektu fluorescencie pozadia a zvýšení pomeru signálu k šumu sa kontrast a rozlíšenie konfokálnych obrázkov výrazne zlepšili v porovnaní s tradičnými fluorescenčnými obrázkami osvetlenia poľa. V mnohých vzorkách je mnoho zložitých štrukturálnych komponentov prepletených, aby vytvorili komplexné systémy, ale akonáhle je možné zhromaždiť dostatok optických rezov, môžeme ich rekonštruovať v 3D pomocou softvéru. Tento experimentálny prístup bol široko používaný v biologickom výskume na objasnenie zložitých štrukturálnych a funkčných vzťahov medzi bunkami alebo tkanivami.
