Učebňa mikroskopického zobrazovania丨Widefield Fluorescenčný mikroskop
V aplikáciách zobrazovania živých buniek uľahčuje fluorescenčná mikroskopia so širokým poľom pozorovanie dynamiky adherentných buniek pestovaných v špecifických environmentálnych komorách umiestnených na stolíku mikroskopu. Vo svojej najzákladnejšej konfigurácii je štandardný invertovaný mikroskop pre tkanivové kultúry vybavený fluorescenčným osvetlením EPI spojený so systémom plošného poľa detektora (zvyčajne CCD kamera), vhodnými fluorescenčnými filtrami a systémom uzávierky na obmedzenie nadmerného vystavenia buniek škodlivému excitačnému svetlu. . Základná fluorescenčná mikroskopia sa spolieha na starostlivo prispôsobené interferenčné filtre na výber špecifických šírok pásma pre osvetlenie a detekciu emitovaného svetla. Svetelné zdroje zahŕňajú ortuťové, xenónové a halogenidové výbojky, laserové systémy rozširujúce lúč a diódy vyžarujúce svetlo (LED), z ktorých všetky vyžadujú rôzne špecifikácie filtra. Syntetické fluorofóry používané vo fluorescenčnej mikroskopii majú emisné spektrá pokrývajúce blízke ultrafialové, viditeľné a blízke infračervené oblasti. Použitie geneticky kódovaných fluorescenčných proteínov výrazne rozšírilo možnosti fluorescenčnej mikroskopie pri zobrazovaní živých buniek, čo umožňuje výskumníkom presne zacieliť na subcelulárne oblasti záujmu.
Nuohai LS 18, nový typ svetelného listového iluminačného mikroskopu nezávisle vyvinutý spoločnosťou Nuohai, je špeciálne navrhnutý na 3D zobrazovanie priehľadných vzoriek veľkých tkanív s vysokým rozlíšením a je určený na skúmanie rôznych neporušených tkanív, ako je mozog, slezina, tenké črevo. obličky, pľúca, srdce a nádor. 3D presná štruktúra orgánov.
Pri fluorescencii so širokým poľom maximalizuje emisia s plnou apertúrou zozbieraná objektívom mikroskopu zaznamenaný signál a zároveň minimalizuje požadovaný expozičný čas. Vzorky tak môžu byť zobrazené s veľmi krátkymi svetelnými periódami. Hlavnou nevýhodou širokopásmového zobrazovania je to, že fluorescencia z oblastí vzdialených od ohniskovej roviny, ako aj signál pozadia, je nežiaduce svetlo, ktoré často zakrýva zaujímavé vlastnosti. Zobrazovanie so širokým poľom preto prináša najlepšie výsledky, keď sú záujmové útvary veľké (napríklad organely) alebo veľmi bodkované. Široká škála vzoriek živých buniek, vrátane adherentných buniek, baktérií, kvasiniek a veľmi tenkých tkanivových rezov, sú ideálnymi kandidátmi na fluorescenčné zobrazovanie so širokým poľom, avšak hrubšie tkanivá (nad 5 mikrónov) sa najlepšie používajú pri zobrazovaní pomocou pokročilejších metód.
Hoci došlo k mnohým pokrokom vo fluorescenčnom zobrazovaní so syntetickými fluorescenčnými farbivami, kvantovými bodkami a fluorescenčnými proteínmi, v niektorých prípadoch je užitočné kombinovať fluorescenciu s inými zobrazovacími metódami. Ako príklad možno DIC použiť v spojení s fluorescenciou so širokým poľom na monitorovanie bunkovej životaschopnosti a všeobecnej morfológie pri štúdiu fenoménov záujmu pre špecifické označené ciele. Získanie DIC a fluorescencie v jednom obrázku je zvyčajne nepraktické, ale v správne nakonfigurovanom mikroskope možno tieto dve techniky použiť postupne. Po zobrazovaní v epifluorescenčnom režime je teda možné získať DIC obrazy z fluorescenčne značených vzoriek pomocou prechádzajúceho svetla. Tieto dva obrázky je možné zlúčiť počas postanalýzy. Súčasné získavanie DIC a fluorescenčných obrazov je možné v pokročilých konfiguráciách mikroskopov so širokým zorným poľom pomocou spektrálne oddeleného osvetlenia (ako viditeľné a blízke infračervené) a adaptérov kamier s dvoma kamerami alebo s rozdeleným pohľadom. Vo väčšine laserových skenovacích konfokálnych mikroskopov je možné snímky získavať súčasne vo fluorescenčnom aj DIC režime, čím sa eliminuje potreba spracovania po akvizícii. Fázový kontrast a Hoffmanov modulačný kontrast sa môžu použiť aj v spojení s fluorescenčnou mikroskopiou so širokým poľom. Pri týchto technikách je však šošovka objektívu špeciálna, či už ide o fázový prstenec alebo Hoffmanovu modulačnú platňu, spôsobí stratu intenzity vyžarovania o 5-15 percent.
Odkaz na článok: Sieť prístrojového vybavenia https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
