Požiadavky na hrúbku optického mikroskopu na podložné sklíčka
Mikroskopická dehydratácia a prichytenie vzorky: V dôsledku opakovaného odstreďovania sa bunky strácajú, preto je najlepšie pripevniť bunky na povrch podložného sklíčka alebo plastovej fólie pre optickú mikroskopiu, aby sa bunky dehydratovali a vysušili spolu so sklom. sklíčko alebo plastovú fóliu. Požiadavky na hrúbku podložných sklíčok v optickej mikroskopii Aby sa bunky mohli prichytiť na podložné sklíčka alebo plastové dosky, je potrebné najskôr položiť vrstvu filmu na podložné sklíčka alebo plastové dosky. Spôsob kladenia fólie je nasledujúci:
(1) Najjednoduchšou metódou pre optickú mikroskopiu je položenie tenkej vrstvy polyvinylformového (formvarového) filmu. Namočte vyčistené sklíčka do (0.5-1) percentného roztoku polyvinylformal chloroformu. Po odparení atmosféry sa na diapozitívoch objaví biely film. Sklíčka niekoľkokrát pretrepte v chloroforme, aby sa film zmenil. Tenké a pripravené na použitie.
(2) Na vyčistené podložné sklíčko kvapnite 0.1 zemepisnej šírky poly-L-lyzín (1 mg poly-lyzínu počas prípravy rozpustite v 1 ml filtrovanej vody) a po rozvinutí kvapky ho vložte do zásobnej krabičky s teplotou 450 °C. . suché. Táto metóda je najlepšia, pretože poly-L-lyzín je kladne nabitý, čo umožňuje pripojiť sa viac povrchovo negatívne nabitých buniek.
(3) Pridajte plazmu a glycerol do destilovanej vody v pomere (30--40) percent a (3-5) percent podľa požiadaviek optického mikroskopu na hrúbku sklíčka, aby sa vytvoril glycerolový proteín Riešenie. Kvapalina sa nakvapká na vyčistené podložné sklíčko, rozloží a vysuší pod optickým mikroskopom. Položený proteínový film sa ponorí do 2 percentného glutaraldehydu, aby sa proteín zafixoval, premyje sa a vysuší na neskoršie použitie. Pred použitím sa plazma nakvapká na proteínový film Make it "aktivovaný", po 30 minútach opláchnite tlmivým roztokom a môže sa priamo aplikovať.
Fixované a vyčistené bunky sa pod digitálnym mikroskopom upravia do vhodnej koncentrácie bunkovej suspenzie s filtrovanou vodou a optický mikroskop sa umiestni na podložné sklíčko alebo plastovú fóliu, ktorá je pokrytá membránou, a umiestni sa do vlhkého, nízkeho teplote (40C) prostredia (30-120) minút, aby sa bunky mohli pripojiť k membráne. Pomocou jemnej pinzety vyberte podložné sklíčko a pretrepte ho v čistej dvakrát destilovanej vode a nepripojené bunky umyte optickým mikroskopom. Požiadavky na hrúbku sklíčok v optických mikroskopoch Polarizačné mikroskopy sa potom rýchlo umiestnia do nádoby naplnenej 50 percentami acetónu (alebo etanolu). Proces dehydratácie spočíva v vložení sklíčok do acetónu alebo etanolu so zvyšujúcou sa koncentráciou každé 3 minúty a optickým mikroskopom alebo nepretržitým zvyšovaním koncentrácie dehydratačného činidla v nádobe na podložné sklíčka. Podľa laboratórnych skúseností autora je pohodlnejšia druhá operácia. Špecifická metóda optickej mikroskopie dokáže každé 3 minúty odsať polovicu dehydratačného činidla z nádoby a potom pridať rovnaké množstvo dehydratačného činidla s koncentráciou 100 percent. Po 5-6 operáciách dosiahne koncentrácia dehydratačného činidla v cenovej nádobe mikroskopu viac ako 0,5 percenta a bunky sa úspešne dehydratujú. Po vysušení v kritickom bode sa podložné sklíčko alebo plastová fólia prilepí na móle vzorky vodivým lepidlom na pokovovanie. Existujú tiež vymoženosti na pripojenie buniek k membránam stanoveným tretím spôsobom. Optický mikroskop dokáže zavesiť bunky fixované nízkou koncentráciou glutaraldehydu na "aktivovaný" proteínový film. Optický mikroskop vyžaduje, aby bola hrúbka podložného sklíčka umiestnená na 10 minút a podložné sklíčko alebo plastová fólia sú namočené v 2 percentách glutaraldehydu. Po 30 minútach opláchnite filtrovanou dvakrát destilovanou vodou a potom vysušte, vysušte a pokovujte podľa vyššie uvedeného spôsobu.
