PH meter - Stanovenie a úprava pH média
Na všetky mikroorganizmy má vplyv pH prostredia, v ktorom žijú. Prítomnosť selektívnych druhov často zužuje rozsah pH, v ktorom rastú. Niekedy môže kyslosť alebo zásaditosť média pôsobiť aj ako faktor selekcie rastu. Pre biochemické testovacie médiá je však rozsah pH, v ktorom mikroorganizmy vykazujú aktivitu tk v substráte, užší ako rozsah pH potrebný na rast: preto je dôležité upraviť pH média na očakávaný rozsah. Keď laboratórium pripravuje médium podľa zloženia média, musí sa skontrolovať a upraviť pH. Je potrebné zdôrazniť, že aj v prípade hotového syntetického dehydrovaného média poskytnutého výrobcom (najmä v prípade niektorých zásobných dehydrovaných médií) je potrebné zmerať konečné pH po vytvorení experimentálneho média.
Najpresnejší spôsob merania pH média je pomocou pH metra. Pred použitím sa musí kalibrovať štandardným tlmivým roztokom so známym pH (zvyčajne je pH 4 až 7). Opláchnite elektródu pH metra destilovanou vodou a ponorte ju do kultivačného média v kadičke a potom odčítajte pH kultivačného média zo stupnice pH metra. Každý výrobca poskytuje podrobné prevádzkové pokyny pre každý typ pH metra.
Pri príprave kultivačného média možno PH ľahko upraviť pomocou pH metra s mechanickým miešaním. Kultivačné médium by sa malo pripraviť v nádobe (ako je veľká kadička), ktorú možno nepretržite miešať. alebo magnety obalené teflónom. Po rozmrazení je potrebné upraviť pH média obsahujúceho agar, čo sa dá ľahko vykonať pomocou vyhrievaného magnetického miešadla. Pri úprave pH použite na kalibráciu pH metra štandardný tlmivý roztok so známym pH. Potom vložte kompozitnú elektródu a odporový teplomer (ak existuje) do média, pomaly pridajte primerané množstvo kyseliny chlorovodíkovej a hydroxidu sodného z konca kadičky smerom od elektródy, aby médium mohlo dosiahnuť a udržiavať požadované pH.
Teplotná kompenzácia pH metra by mala zohľadňovať vplyv teploty na elektródový systém: v niektorých riedeniach a médiách sa pH výrazne mení s teplotou. Pre kvapalné médiá a riedenia možno pH zvyčajne upraviť a merať buď pri 25 stupňoch alebo pri teplote, pri ktorej sa používajú.
Hodnota pH agarového média sa musí po rozpustení upraviť a teplota rozpúšťania je vyššia ako 45 stupňov: preto by sa pH tuhého média malo určiť pri teplote jeho použitia. V tomto čase by sa mala použiť kompozitná elektróda s plochou hlavou a teplotná kompenzácia pH metra by sa mala manuálne kalibrovať. Ak sa pri príprave kultivačného média zistí, že pH kultivačného média je rozdielne medzi stavom topenia a stavom tuhnutia, znamená to, že došlo k chybe v úprave pH.
Podobne, keď je pripravené médium tepelne sterilizované (napr. autoklávované), môže tiež podliehať zmenám pH. V prípade dehydratovaného média to výrobca vzal do úvahy a zvyčajne nie je potrebné upravovať pH, ale pH média, ktoré sa má použiť, by sa malo starostlivo skontrolovať. Ak sa pH dehydrovaného agarového média musí upraviť počas opätovného rozpúšťania alebo prípravy, je najlepšie ho upraviť filtráciou sterilizovanou kyselinou chlorovodíkovou a roztokom hydroxidu sodného po kroku sterilizácie, aby sa zabránilo prehriatiu média. Pri príprave médií s rôznymi surovinami alebo liečivami sa po autoklávovaní musí skontrolovať pH médií. Okrem toho, ak sa zistí, že pH média sa mení po každom autokláve, možno pH vhodne upraviť pri príprave média. Stále je však potrebné určiť konečné pH média po sterilizácii.
