Príprava a pozorovanie biologických vzoriek pre elektrónovú mikroskopiu
Rozlíšenie mikroskopu závisí od vlnovej dĺžky použitého svetla. Elektrónový mikroskop, ktorý sa začal objavovať v roku 1933, používa ako zdroj svetla elektrónový lúč s vlnovou dĺžkou oveľa kratšou ako viditeľné svetlo, takže rozlíšenie, ktoré dokáže dosiahnuť, je výrazne lepšie v porovnaní s optickým mikroskopom. Rozdiel v zdrojoch svetla tiež určuje sériu rozdielov medzi elektrónovými mikroskopmi a optickými mikroskopmi.
Podľa rozdielov v princípoch zobrazovania elektrónovým lúčom a rôznych spôsobov pôsobenia na vzorky sa moderné elektrónové mikroskopy vyvinuli do mnohých typov. V súčasnosti sa najčastejšie používajú transmisné elektrónové mikroskopy a rastrovacie elektrónové mikroskopy. Celkové zväčšenie prvého môže byť medzi 1000-1000000. Celkové zväčšenie druhého z nich sa môže líšiť od 20 do 300,000-krát. Tento experiment predstavuje najmä prípravu dvoch typov mikroskopických vzoriek, transmisného elektrónového mikroskopu a rastrovacieho elektrónového mikroskopu.
2. Vybavenie
1. Baktérie Escherichia coli (Escherichia coli) šikmé.
2. Roztok alebo činidlo amylacetát, koncentrovaná kyselina sírová, absolútny etanol, sterilná voda, 2 % vodný roztok fosfowolfrámanu sodného (pH 6.5-8.0), 0,3 % polyetylénu roztok formaldehydu (rozpustný v chloroforme), bunky Pigment c, octan amónny, plazmid pBR322.
3. Nástroje alebo iné náčinie: obyčajný optický mikroskop, medená sieťka, porcelánový lievik, kadička, miska, sterilné kvapkadlo, sterilné pinzety, špendlíky, sklíčka, počítacia doska, vákuový poťahovací stroj, sušič kritických bodov atď.
3. Prevádzkové kroky
(1) Príprava a pozorovanie vzorky pre transmisnú elektrónovú mikroskopiu
1. Úprava kovovej siete
Vzorka pre optickú mikroskopiu sa umiestni na sklíčko na pozorovanie. Avšak v transmisnej elektrónovej mikroskopii, keďže elektróny nemôžu preniknúť sklenenou tabuľou, sieťové materiály môžu byť použité len ako nosiče, zvyčajne nazývané nosné siete. Nosnú sieťovinu je možné rozdeliť do mnohých rôznych špecifikácií vďaka rôznym materiálom a tvarom, z ktorých najčastejšie používaná je 200-400 sieťka (počet otvorov) medená sieťka. Medenú sieťku je potrebné pred použitím ošetriť, aby sa z nej odstránili nečistoty a udržala sa čistá, inak to ovplyvní kvalitu nosnej fólie a jasnosť fotografií. V tomto experimente sa používa 400-medená sieťka, s ktorou je možné zaobchádzať nasledovne: najprv ju namočte a vybielte amylacetátom na niekoľko hodín, potom ju niekoľkokrát opláchnite destilovanou vodou a potom ju namočte do absolútneho etanolu. dehydratácia. Ak medená sieťka ani po vyššie uvedených metódach nie je čistá, môžete ju namočiť na 1 až 2 minúty do zriedenej koncentrovanej kyseliny sírovej (1:1) alebo niekoľko minút povariť v 1% roztoku NaOH, opláchnuť destilovanou niekoľkokrát zalejte vodou a potom ju vložte do bezvodého Dehydrátu v etanole a odložte.
2. Príprava nosnej membrány
Pri pozorovaní vzoriek by mala byť nosná sieť tiež pokrytá vrstvou neštruktúrovaného rovnomerného filmu, inak malé vzorky vytečú z otvorov nosnej siete. Táto fólia sa zvyčajne nazýva nosná fólia alebo nosná fólia. Nosný film by mal byť transparentný pre elektróny a jeho hrúbka by mala byť vo všeobecnosti menšia ako 20 nm; pri dopade elektrónového lúča by mala mať fólia tiež určitú mechanickú pevnosť, aby sa udržala štrukturálna stabilita a mala by dobrá tepelná vodivosť; okrem toho by sa v elektrónovej mikroskopii mala použiť podporná sieť. Pod ňou by nemala byť žiadna viditeľná štruktúra, žiadna chemická reakcia s prenášanou vzorkou a žiadna interferencia s pozorovaním vzorky. Jeho hrúbka je zvyčajne asi 15 nm. Nosnou fóliou môže byť plastová fólia (ako je kolódiová fólia, polyetylénformaldehydová fólia, atď.), uhlíková fólia alebo kovová fólia (ako je berýliová fólia atď.). Za normálnych pracovných podmienok môže plastová fólia spĺňať požiadavky. Spomedzi plastových fólií sa kolódiová fólia pripravuje pomerne ľahko, ale jej pevnosť nie je taká dobrá ako polyetylénová formaldehydová fólia.
