Princípy a štruktúrne vlastnosti fluorescenčnej mikroskopie
Fluorescenčný mikroskop je použitie vysokej svetelnej účinnosti bodového svetelného zdroja prostredníctvom systému farebného filtrovania na vyžarovanie určitej vlnovej dĺžky svetla (ako je ultrafialové 3650 alebo fialovo-modré 4200) ako excitačné svetlo, excitácia fluorescenčného materiálu vo vnútri preparát vyžaruje množstvo rôznych farieb fluorescencie a potom sa zväčšuje cez objektív a okuláre na pozorovanie. Týmto spôsobom je v silnom kontrastnom pozadí, aj keď je fluorescencia veľmi slabá, ľahko identifikovateľná, vysoká citlivosť, používa sa hlavne na štúdium bunkovej štruktúry a funkcie a chemického zloženia. Základná konštrukcia fluorescenčného mikroskopu sa skladá z bežného optického mikroskopu plus niektorého príslušenstva (ako je zdroj fluorescenčného svetla, excitačné filtre, dvojfarebný separátor lúčov a blokovacie filtre atď.). Fluorescenčný zdroj svetla – všeobecne používaná ultravysokotlaková ortuťová výbojka (50-200W), ktorá môže vyžarovať rôzne vlnové dĺžky svetla, ale každý fluorescenčný materiál má najsilnejšiu vlnovú dĺžku excitácie fluorescencie, takže je potrebné pridať excitačné filtre (všeobecne ultrafialový, fialový, modrý a zelený excitačný filter), takže ožiarením vzoriek prejde len určitá vlnová dĺžka excitačného svetla, zatiaľ čo ostatné svetlo je absorbované. Preto je potrebné pridať excitačný filter (zvyčajne ultrafialové, fialové, modré a zelené excitačné filtre), aby vzorkou prešla len určitá vlnová dĺžka excitačného svetla, zatiaľ čo ostatné svetlo bolo absorbované. Keď je každá látka ožiarená excitačným svetlom, vyžaruje vo veľmi krátkom čase viditeľnú fluorescenciu dlhšej vlnovej dĺžky ako ožiarené svetlo. Fluorescencia má špecifickosť, vo všeobecnosti slabšiu ako excitačné svetlo, aby bolo možné pozorovať špecifickú fluorescenciu v šošovke objektívu za potrebou pridať blokovací (alebo supresívny) filter.
Jeho úloha je dvojaká:
Jedným z nich je absorbovať a blokovať excitačné svetlo do okuláru, aby nedošlo k narušeniu fluorescencie a poškodeniu oka.
Druhým je vybrať a nechať prejsť špecifickú fluorescenciu a ukázať špecifickú fluorescenčnú farbu. Tieto dva typy filtrov je potrebné zvoliť a použiť súčasne.
