Požiadavky na výrobu preparátov pre fluorescenčný mikroskop
(1) Podložné sklo
Hrúbka sklíčka by mala byť medzi 0,8 až 1,2 mm. Ak je sklíčko príliš hrubé, na jednej strane pohltí viac svetla a na druhej strane nedovolí, aby sa excitačné svetlo zhromaždilo na vzorke. Podložné sklíčko musí byť hladké, s jednotnou hrúbkou a bez zjavnej spontánnej fluorescencie. Niekedy sú potrebné sklíčka z kremenného skla.
(2) Zakryte sklíčko
Hrúbka krycieho skla je približne 0,17 mm a je hladké. Na zvýšenie excitačného svetla je možné použiť aj interferenčné krycie sklo. Ide o špeciálne navrhnuté krycie sklo s niekoľkými vrstvami látok (napríklad fluorid horečnatý), ktoré majú rôzne interferenčné účinky na svetlo rôznych vlnových dĺžok. Môže umožniť hladký prechod fluorescencie, zatiaľ čo reflexné excitačné svetlo môže excitovať vzorku.
(3) Vzor
Plátky tkaniva alebo iné vzorky by nemali byť príliš hrubé. Ak sú príliš hrubé, väčšina excitačného svetla sa spotrebuje v spodnej časti preparátu, zatiaľ čo horná časť priamo pozorovaná šošovkou objektívu nie je úplne excitovaná. Okrem toho môže úsudok ovplyvniť prekrývanie buniek alebo maskovanie nečistôt.
(4) Tesniaci prostriedok
Glycerín sa bežne používa ako upevňovacie činidlo, ktoré nesmie mať spontánnu fluorescenciu, je bezfarebné a priehľadné. Jas fluorescencie je relatívne jasný pri pH 8.{1}},5 a nie je ľahké ho rýchlo stratiť. Preto sa ako upevňovacie činidlo bežne používa rovnaká zmes glycerolu a 0,5 mol/lpH9.0-9,5 karbonátového pufra.
(5) Zrkadlový olej
Pri použití fluorescenčného mikroskopu v tmavom poli a olejového mikroskopu na pozorovanie preparátov je potrebné použiť olej na šošovky. Najlepšie je použiť špeciálne vyrobený nefluoreskujúci olej na šošovky, ktorý možno nahradiť aj glycerolom, ako je uvedené vyššie. Možno použiť aj tekutý parafín, ale index lomu je nízky a má mierny vplyv na kvalitu obrazu.
