Zručnosti a metódy používania fluorescenčného mikroskopu
Technické parametre fluorescenčného mikroskopu 1. Širokouhlý okulár 2. Achromatický objektív 3. Štvorotvorový konvertor objektívu 4. Vyžarovací fluorescenčný prístroj modrý (b) zelený (g) budiaci systém 100W ortuťová výbojka 5. Koaxiálna hrubá mikrozaostrovací mechanizmus: rozsah zaostrenia 15 mm, hodnota mikromriežky 0,002 mm 6. Pozdĺžny rozsah pohybu dvojvrstvového mechanického pracovného stola: 70 mm, rozsah bočného pohybu: 50 mm.
Zručnosti a metódy používania fluorescenčného mikroskopu
(1) sklenené sklíčka
Hrúbka sklíčka by mala byť medzi 0.8-1,2 mm až 1,2 mm. Príliš hrubé sklíčko na jednej strane neabsorbuje veľa svetla a na druhej strane nespôsobí, že sa excitačné svetlo hromadí na vzorke. Podložné sklíčko musí byť hladké, s rovnomernou hrúbkou a bez zjavnej spontánnej fluorescencie. Niekedy sú potrebné sklíčka Shi Ying.
(2) Krycie sklo
Krycie sklo má hrúbku približne 0,17 mm a je hladké. Pre zosilnenie excitačného svetla možno použiť aj interferenčné krycie sklo, čo je akési špeciálne krycie sklo s niekoľkými vrstvami látok (napr. fluorid horečnatý), ktoré majú rôzne interferenčné účinky na rôznych vlnových dĺžkach svetla. Fluorescencia môže prechádzať hladko a odrážať excitačné svetlo a toto odrazené excitačné svetlo môže excitovať vzorku.
(3) Vzory
Rezy tkaniva alebo iné vzorky by nemali byť príliš hrubé. Ak je príliš hrubá, väčšina excitačného svetla sa spotrebuje v spodnej časti preparátu, zatiaľ čo horná časť priamo pozorovaná šošovkou objektívu nie je úplne excitovaná. Okrem toho prekrývanie buniek alebo maskovanie nečistôt ovplyvňuje úsudok.
(4) tesniaci prostriedok
Ako tesniaci prostriedok sa bežne používa glycerol, ktorý musí byť bezfarebný a transparentný bez spontánnej fluorescencie. Jas fluorescencie je jasný pri pH 8,5 ~ 9,5 a nie je ľahké rýchlo vyblednúť. Preto sa ako tesniace činidlo často používa ekvivalentná zmes glycerolu a 0,5 mol/l PH9.0 ~ 9,5 karbonátového pufra.
(5) zrkadlový olej
Vo všeobecnosti sa pri pozorovaní vzoriek fluorescenčným mikroskopom v tmavom poli a olejovým zrkadlom musí použiť zrkadlový olej. Najlepšie je použiť špeciálny nefluorescenčný zrkadlový olej, alebo namiesto neho možno použiť vyššie uvedený glycerín. Možno použiť aj tekutý parafín, ale index lomu je nízky, čo má mierny vplyv na kvalitu obrazu.
