Použitie stereo fluorescenčného mikroskopu a bezpečnostné opatrenia
Inštrukcie:
(1) Umiestnite list materiálu na stolík.
(2) Zapnite stabilizátor napätia fluorescenčného mikroskopu. Potom stlačením štartovacej skupiny zapnite UV lampu a nevypínajte ju do 15 minút a znova ju nespúšťajte do 3 minút po vypnutí.
(3) Otočte excitačný filter do polohy v, filter na separáciu farieb do polohy v a vyberte blokovací filter 495 alebo 475 nm.
(4) Na mikroskopické vyšetrenie vyberte fluorescenčný objektívový mikroskop uvFL40, uvFL100.
(5) Pridajte nefluorescenčný olej na sklíčko, najskôr použite 40 x a potom na kontrolu použite 100 x zaostrovací mikroskop. Objaví sa fluorescencia.
(7) Keďže fluorescencia fluorescenčných látok s časom, keď sú ožiarené ultrafialovým svetlom, postupne slabne, zorné pole by sa malo počas mikroskopického skúmania často meniť.
(8) Mikroskopy uvFL10 alebo uvFL20 s nízkym zväčšením možno použiť aj na kontrolu materiálov (pri použití šošoviek s nízkou spotrebou sa nepridáva fluorescenčný olej).
Metóda záznamu fluorescenčného obrazu:
Fluorescenčný obraz pozorovaný fluorescenčným mikroskopom má tak morfologické charakteristiky, ako aj fluorescenčnú farbu a jas. Pri posudzovaní výsledkov je potrebné tieto dve veci skombinovať pre komplexné posúdenie. Výsledky sa zaznamenávajú na základe subjektívnych ukazovateľov, teda vizuálneho pozorovania pracovníkmi. Ako všeobecné kvalitatívne pozorovanie v zásade spoľahlivé. S rozvojom technológie a vedy sa na zaznamenávanie výsledkov úsudku v rôznej miere používajú objektívne indikátory, ako sú bunkové spektrofotometre, analyzátory obrazu a iné prístroje. Výsledky zaznamenané týmito nástrojmi sa však musia kombinovať aj so subjektívnymi úsudkami.
Fotografovanie fluorescenčným mikroskopom je veľmi potrebné na zaznamenávanie fluorescenčných obrázkov. Keďže fluorescencia ľahko mizne a slabne, je potrebné zaznamenávať výsledky v reálnom čase. Metóda je v podstate rovnaká ako pri bežnej mikrofotografii. Stačí použiť vysokorýchlostný fotosenzitívny film, ako je ASA200 alebo vyšší alebo 24. vyššie. Pretože ultrafialové svetlo má silný vplyv na zhášanie fluorescencie, ako sú markery FITC, jas fluorescencie sa pri ožiarení ultrafialovým svetlom na 30 sekúnd zníži o 50 percent. Preto, ak je rýchlosť expozície príliš nízka, fluorescenčnú snímku nemožno nasnímať. Všeobecné výskumné fluorescenčné mikroskopy majú poloautomatické alebo plne automatické zariadenia fotomikrografie.
Prevencia:
(1) Pracujte striktne v súlade s požiadavkami továrenských pokynov pre fluorescenčný mikroskop a nemeňte program podľa vlastného uváženia.
(2) Kontrola by sa mala vykonávať v tmavej miestnosti. Po vstupe do tmavej komory pripojte napájanie a zapáľte ultravysokotlakovú ortuťovú výbojku na 5-15 minút. Keď je silné svetlo zo svetelného zdroja stabilné, oči sa úplne prispôsobia tmavej komore a potom začnú pozorovať preparát.
(3) Aby ultrafialové lúče nepoškodili oči, mali by ste pri nastavovaní svetelného zdroja nosiť ochranné okuliare.
(4) Čas kontroly je prednostne vždy 1-2 hodín. Ak presiahne 90 minút, intenzita osvetlenia ultravysokotlakovej ortuťovej výbojky sa postupne zníži a fluorescencia zoslabne; po ožiarení vzorky ultrafialovými lúčmi po dobu 3-5 minút bude fluorescencia tiež výrazne oslabená; preto by to nemalo presiahnuť maximálne 2-2 hodín. 3h.
(5) Životnosť svetelného zdroja fluorescenčného mikroskopu je obmedzená a vzorky by sa mali kontrolovať kolektívne, aby sa ušetril čas a ochránil sa svetelný zdroj. Keď je horúce počasie, mali by sa pridať ventilátory, ktoré odvádzajú teplo, a nové žiarovky by sa mali zaznamenávať od začiatku času ich používania. Ak ju chcete po zhasnutí lampy znova použiť, musíte pred zapálením počkať, kým žiarovka dostatočne nevychladne. Vyhnite sa zapáleniu svetelného zdroja niekoľkokrát denne.
(6) Pozorujte vzorku ihneď po zafarbení, pretože fluorescencia bude časom postupne slabnúť. Ak sa vzorka skladuje v polyetylénovom plastovom vrecku pri 4 stupňoch, čas zoslabenia fluorescencie sa môže oneskoriť a montážnemu prostriedku sa môže zabrániť v odparovaní.
(7) Posudkový štandard jasu fluorescencie: vo všeobecnosti sa delí na štyri úrovne, to znamená „jedna“ – nie je vidieť žiadnu alebo slabú fluorescenciu. " plus "— Vidieť len jasne viditeľnú fluorescenciu. „plus plus“ — Viditeľné a jasné
