Rozdiel medzi laserovým konfokálnym mikroskopom a tradičným optickým mikroskopom
Laserová skenovacia konfokálna fluorescenčná mikroskopia je relatívne pokročilý nástroj na analýzu molekulárnej a bunkovej biológie, ktorý využíva počítač, laser a technológiu spracovania obrazu na získanie trojrozmerných údajov biologických vzoriek. Používa sa hlavne na pozorovanie štruktúry živých buniek a biologických zmien špecifických molekúl a iónov, kvantitatívnu analýzu a kvantitatívne stanovenie v reálnom čase.
Princíp laserovej konfokálnej mikroskopie: na realizáciu bodového osvetlenia a detekcie bodu použite osvetľovaciu dierku umiestnenú za zdrojom svetla a detekčnú dierku umiestnenú pred detektorom. Svetlo vyžarované zo zdroja svetla cez osvetľovaciu dierku je zaostrené na bod v ohniskovej rovine vzorky a emitovaná fluorescencia z tohto bodu sa zobrazuje na detekčnej dierke a akékoľvek vyžarované svetlo mimo tohto bodu je blokované detekciou. dierka. Iluminačná dierka a detekčná dierka sú konjugované s ožiareným bodom alebo detegovaným bodom, takže detegovaný bod je konfokálny bod a rovina, kde sa nachádza detegovaný bod, je konfokálna rovina.
Počítač zobrazuje zistené body na obrazovke počítača vo forme obrazových bodov. Aby sa vytvoril úplný obraz, skenovací systém v optickej dráhe skenuje ohniskovú rovinu vzorky, aby vytvoril úplný konfokálny obraz. Pokiaľ sa stolík pohybuje hore a dole pozdĺž osi Z, nová vrstva vzorky sa presunie do konfokálnej roviny a nová vrstva vzorky sa zobrazí na monitore. Pri kontinuálnom pohybe osi Z možno získať súvislé obrazy rôznych vrstiev vzorky. Svetlo rezaný obrázok.
Rozdiel medzi tradičnými svetelnými mikroskopmi
Tradičné fluorescenčné mikroskopy majú neprekonateľný nedostatok: fluorescenčné štruktúry mimo ohniskovej roviny sú rozmazané a rozmazané. Dôvodom je, že väčšina biologických vzoriek má prekrývajúce sa štruktúry. Ak sú fluorescenčne značené štruktúry distribuované na rôznych úrovniach a prekrývajú sa, rozptylová fluorescencia zhora alebo pod ohniskovou rovinou je tiež prijatá šošovkou objektívu a rozlíšenie fluorescenčného mikroskopu sa výrazne zlepší. znížiť.
Na základe tradičných optických mikroskopov využívajú laserové skenovacie konfokálne mikroskopy laserové svetlo ako zdroj svetla, prijímajú princíp a zariadenie konjugovaného zaostrovania a využívajú počítače na vykonávanie digitálneho spracovania obrazu, pozorovania, analýzy a výstupu pozorovaných objektov. Vzorka môže byť tomograficky skenovaná a zobrazená na nedeštruktívne pozorovanie a analýzu trojrozmernej priestorovej štruktúry buniek. Zároveň pomocou imunofluorescenčného značenia a iónových fluorescenčných značiacich sond dokáže táto technológia nielen pozorovať fixované bunky a tkanivové rezy, ale aj vykonávať dynamické pozorovanie a detekciu štruktúry, molekúl, iónov a životných aktivít živých buniek v reálnom čase. na subcelulárnej úrovni Pozorovanie fyziologických signálov, ako je Ca2 plus, hodnota pH, membránový potenciál a zmeny v morfológii buniek, sa stalo novou generáciou výkonných výskumných nástrojov v oblasti morfológie, molekulárnej bunkovej biológie, neurovedy, farmakológie a genetiky.
