Úloha každého filtra vo fluorescenčnej mikroskopii
Najdôležitejším problémom fluorescenčnej mikroskopie je kombinácia filtrov, pričom excitačný filter aj tieniaci filter musia byť vhodné pre pozorované fluorescenčné teleso a musia byť navzájom prispôsobené. Pre určité špecifické účely, ak dôjde k chybe pri výbere filtra, môže to viesť k nedorozumeniam a dokonca k nesprávnym výsledkom. Výdobytky technológie fluorescenčnej mikroskopie a použitie kvalitných filtrov a dômyselných filtračných skupín sú neoddeliteľné. Existuje niekoľko typov filtrov pre fluorescenčnú mikroskopiu.
1. Filter absorbujúci teplo
Filter absorbujúci teplo je nevyhnutným filtrom, ktorý zabraňuje tepelnému žiareniu v spektre svetelného zdroja poškodiť skupinu optických zariadení. Skoré pokročilé mikroskopy boli vybavené fľašami v tvare bubna, ktoré mohli obsahovať destilovanú vodu ako zariadenia pohlcujúce teplo. Moderné výskumné mikroskopy vo veľkom meradle sú vybavené sklenenými filtrami absorbujúcimi teplo vo svetelných boxoch alebo komorách svetelného zdroja, ktoré sú priehľadné, mierne žlté sklenené tabule. Leitzove filtre KG1 (2 mm) a BG38 (4 mm) dokážu prepustiť takmer všetky spektrá ultrafialového a viditeľného svetla, čo z nich robí filtre so svetelným tokom až 98 %. Iba selektívne absorbuje čiary infračerveného fototermálneho žiarenia.
2. Filter budenia
Excitačné filtre môžu selektívne absorbovať spektrálne čiary s dlhými vlnovými dĺžkami a prepúšťať iba ultrafialové svetlo. Filtre pre fialové, modré a zelené svetlo sú excitačné filtre. Filtre Zeiss, Reichert, Olympus B-séria, G-séria, BG séria, Shott UG séria, Opton H, G, BP séria, Leitz séria BP a ďalšie filtre sú všetky excitačné filtre.
3. Blokovací filter
Blokovací filter je filter, ktorý selektívne absorbuje spektrálne čiary krátkej vlnovej dĺžky a infračervené žiarenie, čo umožňuje pozorovateľovi vidieť fluorescenciu vyžarovanú testovaným objektom a zároveň chráni rohovku pred poškodením UV žiarením.
4. Filter na separáciu farebného svetla
Filter na separáciu farebného svetla je filter, ktorý odráža excitačné svetlo na testovaný objekt, čo spôsobuje, že objekt vyžaruje fluorescenciu, a potom fluorescenciu prenáša do okuláru. Tento typ filtra je možné použiť len v koncentrátoroch lúčov s dopadajúcim lúčom, zatiaľ čo transmisná svetelná fluorescenčná mikroskopia nevyžaduje separáciu farieb.
5. Interferenčný filter
Interferenčný filter je typ vysokovýkonného budiaceho filtra. Je to filter vyrobený naskladaním niekoľkých tenkých kovových filmov medzi dve leštené sklenené tabule. Index lomu každého tenkého kovového filmu je odlišný, takže spektrálne čiary rôznych vlnových dĺžok svetelného zdroja osvetlenia sa opakovane odrážajú na každom kovovom filme, čo spôsobuje, že niektoré vlnové dĺžky spektrálnych čiar sa v dôsledku deštruktívnej interferencie rušia, zatiaľ čo iné sú zosilnené aditívne rušenie a prenášané cez. Výsledkom je filter s úzkym prenosovým spektrom, polovičnou šírkou píku iba 6~20 nm a priepustnosťou 60%~70%.
