Existujú dva typy fluorescenčných mikroskopov na základe ich svetelných dráh:
1. Transmisný fluorescenčný mikroskop: Zdroj excitačného svetla sa používa na vybudenie fluorescencie prechodom cez materiál vzorky cez kondenzorovú šošovku. Možno použiť aj bežne používané koncentrátory tmavého poľa a bežné koncentrátory možno použiť na nastavenie reflektora tak, aby presmeroval a postranné laloky excitačného svetla na vzorku. Ide o relatívne staromódny fluorescenčný mikroskop. Jeho výhodou je silná fluorescencia pri malom zväčšení, nevýhodou však je, že so zvyšujúcim sa zväčšením jeho fluorescencia klesá. Preto je lepšie na pozorovanie väčších vzoriek materiálov.
2. Fluorescenčný mikroskop s padajúcim svetlom je nový typ fluorescenčného mikroskopu vyvinutý v modernej dobe. Na rozdiel od vyššie uvedeného dopadá excitačné svetlo zo šošovky objektívu smerom nadol na povrch preparátu, pričom sa na zber fluorescencie používa rovnaká šošovka objektívu ako osvetľovací kondenzor a šošovka objektívu. K optickej dráhe, ktorá je od svetelného uránu vzdialená 45 stupňov, je potrebné pridať dvojfarebný rozdeľovač lúčov. Uhol, excitačné svetlo sa odráža do šošovky objektívu a zaostrí sa na vzorku. Fluorescencia generovaná vzorkou, ako aj excitačné svetlo odrazené od povrchu šošovky objektívu a krycieho skla, vstupujú do šošovky objektívu a vracajú sa do dvojfarebného rozdeľovača lúčov, čím sa oddeľuje excitačné svetlo a fluorescencia. Zvyškové excitačné svetlo je potom absorbované blokovacím filtrom. Ak sa použijú rôzne kombinácie excitačných filtrov/dvojfarebných lúčových separátorov/blokovacích filtrov, môžu spĺňať potreby rôznych fluorescenčných reakčných produktov. Výhody tohto fluorescenčného mikroskopu sú rovnomerné osvetlenie poľa, jasné zobrazenie a silnejšia fluorescencia s väčším zväčšením.
Návod na použitie fluorescenčného mikroskopu
1. Zapnite zdroj svetla. Ultravysokotlaková ortuťová výbojka sa musí na niekoľko minút predhriať, aby sa dosiahol maximálny jas.
2. Transmisná fluorescenčná mikroskopia vyžaduje inštaláciu požadovaného excitačného filtra medzi zdroj lampy a kondenzor a zodpovedajúci blokovací filter za šošovku objektívu. Fluorescenčný mikroskop s padajúcim svetlom potrebuje vložiť požadovaný excitačný filter/dvojfarebný rozdeľovač lúčov/blokovací blok filtra do štrbiny optickej dráhy.
3. Pozorujte mikroskopom s nízkym výkonom a nastavte stred svetelného zdroja podľa nastavovacieho zariadenia rôznych typov fluorescenčných mikroskopov tak, aby sa nachádzal v strede celého osvetľovacieho bodu.
4. Umiestnite preparát a zaostrite ho na pozorovanie. Počas používania by ste mali venovať pozornosť: Pred inštaláciou filtra nepozorujte priamo očami, aby ste predišli poškodeniu zraku; Pri pozorovaní vzoriek olejovým mikroskopom sa musí použiť špeciálny nefluorescenčný olejový mikroskop; Po vypnutí vysokotlakovej ortuťovej výbojky ju nie je možné okamžite znova zapnúť. Reštartovanie trvá 5 minút, inak bude nestabilné a ovplyvní životnosť ortuťovej výbojky.
(3) Pozorovaním pod fluorescenčným mikroskopom na vyučovacej platforme s použitím filtra s modrofialovým svetlom je možné vidieť bunky zafarbené fluorescenčným farbivom 0,01 % akridínová oranžová. Jadro a cytoplazma sú excitované, aby vytvorili dve rôzne farby fluorescencie (tmavozelenú a oranžovú červenú).
