Zvislý biofluorescenčný mikroskop
Princíp fluorescenčnej mikroskopie je použitie vysoko účinného bodového zdroja svetla (ako je napríklad ultra-vysoký tlak ortuťový lampa) na emitovanie určitej vlnovej dĺžky svetla (ako je napríklad ultrafialové svetlo 3650 λ alebo fialové modré svetlo 4200 λ) prostredníctvom excitačného svetla, ktoré excituje fluorestné látky v vzorke, aby vyžarovali rôzne farby chluorovej fluorescencie. Potom sa filtruje blokovacím (alebo potlačujúcim) filtrom za objektívnu šošovku a pozoruje sa pomocou zväčšovacieho účinku okulára.
Blokovací filter má dve funkcie: po prvé, absorbuje a blokuje excitačné svetlo vstupu do okulára, aby sa zabránilo narušeniu s fluorescenciou a poškodzovaním očí; Druhým je výber a umožnenie prejsť špecifickú fluorescenciu, ktorá vykazuje špecifickú fluorescenčnú farbu.
Fluorescenčné mikroskopy možno rozdeliť na dva typy na základe princípu ľahkej cesty:
1. Fluorescenčný mikroskop prenosu
Staršie fluorescenčné mikroskopy používajú bodové svetlo na excitáciu fluorescencie prejdením zdroja excitačného svetla cez materiál vzorky. Jeho výhodou je silná fluorescencia pri nízkom zväčšení, ale jej nevýhodou je, že jej fluorescencia klesá so zvyšujúcim sa zväčšením. Preto je vhodný iba na pozorovanie väčších materiálov vzorky.
2. Fluorescenčný mikroskop Falling Light
Excitačné svetlo spadne z objektívnej šošovky na povrch vzorky, pričom na zhromažďovanie fluorescencie použije rovnakú objektívu ako osvetľovací kondenzátor a objektívu objektívu.
Do optickej dráhy sa musí pridať dvojitý farebný štiepok (dichroické zrkadlo), ktorá tvorí uhol 45 stupňov s optickou osou. Excitačné svetlo sa odráža do objektívnej šošovky a zameriava sa na vzorku. Fluorescencia generovaná vzorkou, ako aj excitačné svetlo odrážané z povrchu objektívnej šošovky a krytého skla, zadajte objektívny objektív súčasne a vráťte sa do štiepača duálneho farebného lúča, aby sa oddelilo excitačné svetlo a fluorescenciu. Zvyšné excitačné svetlo sa potom blokuje absorpciou filtra. Ak sa používajú rôzne kombinácie excitačných filtrov, oddeľovače duálnych farebných lúčov a blokovacie filtre, môžu uspokojiť potreby rôznych fluorescenčných reakčných produktov.
Výhody tohto fluorescenčného mikroskopu sú rovnomerné osvetlenie poľa, číre zobrazovanie a silnejšia fluorescencia s väčším zväčšením.
