Aké sú rozdiely medzi fluorescenčnou mikroskopiou a inverznou mikroskopiou
Mikroskop je dôležitým nástrojom v bunkových kultúrach a súvisiacich experimentoch s derivátmi. V súčasnosti sú na trhu rôzne druhy mikroskopov a výber mikroskopu, ktorý zodpovedá potrebám a je vhodný, je výzvou. Nižšie predstavíme princípy inverzných mikroskopov a fluorescenčných mikroskopov, z ktorých si vyberie každý.
Invertovaný mikroskop, podobne ako bežný mikroskop, pozostáva hlavne z troch častí: mechanickej časti, osvetľovacej časti a optickej časti.
Zloženie inverzného mikroskopu je rovnaké ako zloženie bežného mikroskopu, s výnimkou toho, že šošovka objektívu a systém osvetlenia sú obrátené, pričom prvý je pod stolíkom a druhý nad stolíkom.
Táto štruktúra výrazne rozširuje efektívnu vzdialenosť medzi osvetľovacím bodovým systémom a stolíkom, čím uľahčuje umiestňovanie hrubších pozorovacích nástrojov, ako sú kultivačné misky a fľaštičky na bunkové kultúry (samozrejme je možné použiť aj sklenené podložné sklíčka), pričom pracovná vzdialenosť medzi objektív a materiál nemusí byť veľmi veľký.
Invertovaný mikroskop využívajú lekárske a zdravotnícke inštitúcie, univerzity a výskumné ústavy na pozorovanie mikroorganizmov, buniek, baktérií, tkanivových kultúr, suspenzií, sedimentov a pod. Môže nepretržite sledovať proces bunkovej a bakteriálnej proliferácie a delenia v kultivačnom médiu a dokáže zachytiť akúkoľvek formu tohto procesu.
Široko používaný v oblastiach ako je cytológia, parazitológia, onkológia, imunológia, genetické inžinierstvo, priemyselná mikrobiológia a botanika.
Fluorescenčná mikroskopia sa používa na štúdium absorpcie, transportu, distribúcie a lokalizácie látok v bunkách.
Pre testovaný objekt existujú dva spôsoby generovania fluorescencie: spontánna fluorescencia, ktorá je priamo emitovaná ultrafialovým žiarením; Sekundárna fluorescencia nastáva, keď je pozorovaný objekt ošetrený fluorescenčnými farbivami a vystavený ultrafialovému svetlu pred vyžiarením fluorescencie.
Niektoré látky v bunkách, ako napríklad chlorofyl, po vystavení ultrafialovému žiareniu vytvárajú spontánnu fluorescenciu; Niektoré látky samotné nemusia vyžarovať fluorescenciu, ale ak sú zafarbené fluorescenčnými farbivami alebo fluorescenčnými protilátkami, môžu vyžarovať aj sekundárnu fluorescenciu pod ultrafialovým žiarením.
Fluorescenčný mikroskop využíva bodový svetelný zdroj s vysokou svetelnou účinnosťou na vyžarovanie určitej vlnovej dĺžky svetla (UV 365nm alebo UV modrá 420nm) cez systém farebného filtrovania ako excitačné svetlo, ktoré excituje fluorescenčné látky vo vzorke, aby vyžarovali rôzne farby fluorescencie. Potom sa pozoruje prostredníctvom zväčšenia šošovky objektívu a okuláru.
Týmto spôsobom je aj pri slabej fluorescencii ľahko rozpoznateľný a vysoko citlivý na silnom kontrastnom pozadí. Používa sa hlavne na štúdium bunkovej štruktúry, funkcie a chemického zloženia.
