Aký druh mikroskopu sa používa na zobrazenie tvaru mikrobiálnych buniek
Súhrnné označenie pre všetky drobné organizmy, ktoré sú pre jednotlivcov ťažko pozorovateľné voľným okom. Medzi mikroorganizmy patria baktérie, vírusy, huby a niekoľko rias. (Niektoré mikroorganizmy sú však viditeľné voľným okom, napr. huby patriace medzi huby, Ganoderma lucidum a pod.) Vírusy sú typom „nebunkových organizmov“ zložených z niekoľkých zložiek, ako sú nukleové kyseliny a bielkoviny, no ich prežitie musí závisieť od živých buniek. Podľa rôznych prostredí, ktoré existujú, ich možno rozdeliť na prokaryotické mikroorganizmy, vesmírne mikroorganizmy, hubové mikroorganizmy, kvasinkové mikroorganizmy, morské mikroorganizmy atď.
Úloha a poškodenie mikroorganizmov:
Jedným z najdôležitejších vplyvov mikroorganizmov na človeka je výskyt infekčných chorôb. 50 percent ľudských chorôb spôsobujú vírusy. História mikróbov spôsobujúcich ľudské choroby je históriou neustáleho boja ľudí s nimi. Ľudské bytosti urobili veľký pokrok v prevencii a liečbe chorôb, ale stále sa vyskytujú nové a znovu sa objavujúce mikrobiálne infekcie, ako je veľké množstvo vírusových ochorení, ktorým chýbajú účinné terapeutické lieky. Patogénny mechanizmus niektorých chorôb nie je jasný. Zneužívanie veľkého množstva širokospektrálnych antibiotík spôsobilo silný selekčný tlak, čo spôsobilo mutáciu mnohých kmeňov, čo viedlo k vzniku liekovej rezistencie a ľudské zdravie je ohrozené novými hrozbami. Niektoré segmentované vírusy môžu mutovať rekombináciou alebo preskupením. Najtypickejším príkladom je vírus chrípky.
Po oboznámení sa so špecifickou definíciou mikroorganizmov, aký typ mikroskopu by mal experimentátor použiť pri štúdiu mikroorganizmov, aby videl a aký mikroskop možno použiť na lepšie videnie a na pozorovanie a analýzu bežných mikrobiálnych foriem.
Vynález mikroskopu je schopný vidieť usmievajúce sa predmety, ktoré nie je možné vidieť voľným okom. Veľkosť mikroorganizmov je veľmi malá, preto ich treba zväčšovať a pozorovať pomocou mikroskopu. Okrem toho existuje veľa druhov mikroorganizmov, takže v podstate väčšina optických mikroskopov dokáže pozorovať mikroorganizmy, ďalšou otázkou je, aký typ mikroskopu by sa mal použiť na pozorovanie a analýzu mikroorganizmov. Bežné mikroskopy na pozorovanie mikrobiálnej morfológie zahŕňajú biologické mikroskopy, mikroskopy s fázovým kontrastom, inverzné mikroskopy, fluorescenčné mikroskopy a konfokálne mikroskopy. Mikroskop a pod.
Nasleduje popis rôznych mikroskopov používaných na pozorovanie mikroorganizmov:
1. Bežný svetelný mikroskop
Ako zdroj svetla sa používa prirodzené svetlo alebo svetlo a jeho vlnová dĺžka je približne {{0}},4 μm. Rozlíšenie mikroskopu je polovica vlnovej dĺžky, teda 0,2 μm, a najmenší obraz viditeľný voľným okom je 0,2 mm. Preto použitie olejového (ponorného) zrkadla na 1000-násobné zväčšenie môže zväčšiť 0,2 μm častice na 0,2 mm viditeľné voľným okom. Na pozorovanie baktérií, aktinomycét a húb možno použiť bežné optické mikroskopy.
2. Mikroskopia v tmavom poli sa bežne používa na pozorovanie nezafarbenej mikrobiálnej morfológie a pohybu. Po nainštalovaní kondenzora tmavého poľa do bežného mikroskopu svetlo nemôže preniknúť priamo zo stredu a zorné pole je tmavé. Keď vzorka dostane šikmé svetlo z okraja kondenzora, môže sa rozptýliť, takže na pozadí tmavého poľa možno pozorovať jasné mikroorganizmy, ako sú baktérie alebo spirochéty.
3. Mikroskop s fázovým kontrastom Mikroskop s fázovým kontrastom využíva svetelný efekt dosky s fázovým rozdielom na zmenu svetelnej fázy a amplitúdy priameho svetla a premenu rozdielu svetelnej fázy na rozdiel intenzity svetla. Pod mikroskopom s fázovým kontrastom, keď svetlo prechádza cez nezafarbenú vzorku, je rozdiel vo fáze svetla spôsobený nejednotnosťou hustoty rôznych častí vzorky a možno pozorovať morfológiu, vnútornú štruktúru a spôsob pohybu mikroorganizmov.
4. Fluorescenčný mikroskop Fluorescenčný mikroskop je v podstate rovnaký ako bežný optický mikroskop, hlavným rozdielom je zdroj svetla, filter a kondenzor. V súčasnosti väčšina z nich využíva episvetelné zariadenia a ako zdroje svetla sa bežne používajú vysokotlakové ortuťové výbojky, ktoré môžu vyžarovať ultrafialové alebo modrofialové svetlo. Existujú dva druhy filtrov: excitačný filter a absorpčný filter. Okrem všeobecných kondenzorov s jasným poľom možno vo fluorescenčných mikroskopoch použiť aj kondenzory s tmavým poľom, ktoré využívajú modré svetlo na zvýšenie kontrastu medzi fluorescenciou a pozadím. Táto metóda je použiteľná na detekciu alebo identifikáciu baktérií zafarbených fluorescenčnými pigmentmi alebo kombinovaných s fluorescenčnými protilátkami.
5. Elektrónové mikroskopy využívajú ako zdroj svetla tok elektrónov. Vlnová dĺžka je v porovnaní s viditeľným svetlom desaťtisíckrát odlišná, čo výrazne zlepšuje rozlíšenie. Magnetická cievka sa používa ako systém optického zosilnenia a zväčšenie môže dosiahnuť desaťtisíce alebo stovky tisíc krát. Často sa používa vo vírusových časticiach. a pozorovanie bakteriálnej ultraštruktúry.
Pozorovanie nezafarbených mikrobiálnych vzoriek:
Nezafarbené vzorky možno vo všeobecnosti použiť na pozorovanie morfológie, sily a pohybu baktérií. Baktérie sú bez zafarbenia bezfarebné a priehľadné a pod mikroskopom sa pozorujú najmä podľa rozdielu medzi indexom lomu baktérií a okolitým prostredím. Baktérie s bičíkmi sa energicky pohybujú, zatiaľ čo baktérie bez bičíkov vykazujú nepravidelný Brownov pohyb. Životaschopné baktérie ako Treponema pallidum, Leptospira a Campylobacter majú charakteristické tvary a pohybové vzorce, ktoré majú diagnostický význam. Bežne používané metódy sú metóda poklesu tlaku, metóda pendantného poklesu a kapilárna metóda.
1. Metóda závesnej kvapky Naneste vazelínu okolo konkávneho otvoru čistého konkávneho podložného sklíčka, odoberte krúžok bakteriálnej suspenzie s očkovacou slučkou a vložte ho do stredu krycieho skla, potom zarovnajte konkávny otvor konkávneho podložného sklíčka pomocou kvapku v strede krycieho skla a Nasaďte kryt, potom ho rýchlo otočte, zľahka zatlačte na krycie sklíčko, aby sa pevne prilepilo na vazelínu na okraji vydutého otvoru, a potom pozorujte pod vysokým výkonom mikroskop (alebo tmavé pole).
2. Vezmite krúžok bakteriálnej suspenzie s očkovacou slučkou a umiestnite ho do stredu čistého podložného sklíčka metódou poklesu tlaku a jemne prikryte bakteriálnu suspenziu krycím sklom, pričom dávajte pozor, aby ste zabránili vytváraniu vzduchových bublín a zabránili bakteriálna suspenzia z pretečenia. Pozorovanie v jasnom (alebo tmavom poli) pod vysokovýkonným objektívom.
3. Na vyšetrenie kinetiky anaeróbnych baktérií sa používa najmä kapilárna metóda. Zvyčajne vyberte dĺžku 60~7{5}}mm. Po nasatí suspenzie anaeróbnych baktérií cez kapiláru s otvorom 0.5-1.0 mm utesnite dva konce kapiláry plameňom. Kapilára bola pripevnená na podložné sklíčko plastovým papierom a pozorovaná pod vysokovýkonnou šošovkou v tmavom poli.
Pozorovanie zafarbených mikrobiálnych vzoriek mikroskopom:
Po zafarbení bakteriálnej vzorky je možné v dôsledku ostrého farebného kontrastu medzi baktériami a okolitým prostredím určiť morfologické vlastnosti baktérií (ako je veľkosť, tvar, usporiadanie atď.) baktérií a niektoré špeciálne štruktúry. jasne pozorované pod bežným optickým mikroskopom (ako sú kapsuly, bičíky, spóry atď.) a baktérie môžu byť klasifikované a identifikované podľa reaktivity farbenia.
(1) Všeobecný postup farbenia baktérií Všeobecný postup farbenia baktérií je: náter (sušenie)—fixácia—zafarbenie.
1. Náter Príprava krvi, sekrétov, exkrétov, punkčnej tekutiny a tekutej kultúry a priame nátierky z tenkého filmu na podložné sklíčka; pitva alebo infikované tkanivá zvierat, potrite léziu vatovým tampónom na odber vzoriek. Na prípravu bakteriálnych kolónií alebo trávnikov na pevnom médiu najskôr pomocou očkovacej slučky odoberte krúžok normálneho fyziologického roztoku a vložte ho do stredu podložného sklíčka, potom pomocou sterilnej očkovacej slučky odoberte malé množstvo kultúry a rozdrvte ju. rovnomerne v normálnom fyziologickom roztoku a rozotrite na 1 cm2 Veľké alebo malé natreté povrchy, nechajte prirodzene vyschnúť pri izbovej teplote alebo pomaly sušte z diaľky.
2. Účelom fixácie je zabiť baktérie, koagulovať bakteriálny proteín a štruktúru a uľahčiť farbenie; podporovať priľnutie baktérií na podložnom sklíčku, aby nedošlo k ich spláchnutiu vodou počas umývania; zmeniť priepustnosť baktérií pre farbivá, čo je prospešné pre štruktúru bakteriálnych buniek farbenia. Väčšinou sa fixuje zahriatím plameňom a zaschnutá mazanica sa 3x rýchlo pretiahne plameňom. Pokožku na chrbte ruky pri dotyku sklíčka radšej nespálite.
3. Farbenie Podľa rôznych kontrolných účelov vyberte rôzne spôsoby farbenia na farbenie. Pri farbení pridajte roztok farbiva po kvapkách, aby ste zvýšili krytie.
4. Moridlo Každá látka, ktorá môže zvýšiť afinitu medzi farbivom a farbeným predmetom, fixovať farbivo na farbenom predmete a spôsobiť zmenu priepustnosti bunkovej membrány, sa nazýva moridlo. Bežne sa používajú kamenec, kyselina trieslová, soli kovov a jód atď., Na podporu sfarbenia sa používa aj zahrievanie. Moridlá môžu byť použité medzi primárnym farbením a kontrastným farbením a môžu byť tiež použité po fixácii alebo obsiahnuté vo fixatíve a farbení.
5. Odfarbovanie Akékoľvek chemické činidlo, ktoré dokáže odstrániť farbu farbeného predmetu, sa nazýva odfarbovač. Ako odfarbovače sa bežne používajú etanol, acetón atď. Odfarbovacie činidlo dokáže zistiť stupeň stability kombinácie baktérií a farbív, ktoré možno použiť na diferenciálne farbenie.
6. Kontrafarbenie Baktérie alebo ich štruktúry, ktoré boli odfarbené, sú často kontrastne zafarbené roztokom kontrastného farbiva pre ľahké pozorovanie. Farba kontrastného farbiaceho roztoku je odlišná od farby primárneho farbiaceho roztoku, aby sa vytvoril ostrý kontrast. Kontrafarbenie by nemalo byť príliš silné, aby neprekrylo farbu pôvodného farbenia.
