Prečo potrebujete použiť konfokálny mikroskop?
1. Optické mikroskopy dosiahli stav dokonalosti vďaka úsiliu a zdokonaľovaniu našich veľkých predchodcov. V skutočnosti nám obyčajné mikroskopy môžu poskytnúť krásne mikroskopické obrazy jednoducho a rýchlo. Stala sa však udalosť, ktorá priniesla do tohto takmer dokonalého sveta mikroskopu revolučnú inováciu. Toto bol vynález „laserového skenovacieho konfokálneho mikroskopu“. Charakteristickým znakom tohto nového typu mikroskopu je, že využíva optický systém, ktorý extrahuje obrazové informácie len na povrchu, kde je zaostrené ohnisko, a pri zmene ohniska získané informácie obnovuje v obrazovej pamäti, čím získava kompletné 3D informácie. Živý obraz inteligencie. Pomocou tejto metódy možno ľahko získať informácie o tvare povrchu, ktoré nemožno potvrdiť bežným mikroskopom. Navyše pre bežné optické mikroskopy sú „zvýšenie rozlíšenia“ a „prehĺbenie hĺbky ostrosti“ protichodnými podmienkami, najmä pri veľkých zväčšeniach. V konfokálnej mikroskopii je však tento problém ľahko vyriešený.
2. Výhody konfokálneho optického systému
Konfokálny optický systém vykonáva bodové osvetlenie vzorky a odrazené svetlo tiež používa bodový receptor na príjem svetla. Keď je vzorka umiestnená do ohniska, takmer všetko odrazené svetlo môže dosiahnuť fotoreceptor. Keď je vzorka rozostrená, odrazené svetlo nemôže dosiahnuť fotoreceptor. Inými slovami, v konfokálnom optickom systéme bude na výstupe len obraz, ktorý sa zhoduje s ohniskom, a budú tienené svetelné škvrny a zbytočné rozptýlené svetlo.
3. Prečo používať laser?
V konfokálnom optickom systéme je vzorka osvetlená v bode a odrazené svetlo je tiež prijímané pomocou bodového fotoreceptora. Preto sú potrebné bodové svetelné zdroje. Lasery sú veľmi bodové zdroje svetla. Vo väčšine prípadov svetelný zdroj konfokálnych mikroskopov využíva laserové svetelné zdroje. Okrem toho charakteristiky lasera, ako je monochromatickosť, smerovosť a vynikajúci tvar lúča, sú tiež dôležitými dôvodmi jeho širokého prijatia.
4. Je možné pozorovanie v reálnom čase založené na vysokorýchlostnom skenovaní
Pre laserové skenovanie sa v horizontálnom smere používa akustický optický deflektor (AO prvok) a vo vertikálnom smere servo elektricky ovládané zrkadlo na skenovanie lúča (Servo Galvano-mirror). Keďže akusticko-optická vychyľovacia jednotka nemá mechanickú vibračnú časť, môže skenovať vysokou rýchlosťou, čo umožňuje pozorovanie v reálnom čase na monitorovacej obrazovke. Vysoká rýchlosť tohto druhu snímkovania je veľmi dôležitou položkou, ktorá priamo ovplyvňuje rýchlosť zaostrovania a získavania polohy.
5. Vzťah medzi polohou zaostrenia a jasom
V konfokálnom optickom systéme je jas maximálny, keď je vzorka správne umiestnená v polohe zaostrenia a jej jas sa pred ňou a za ňou prudko zníži (plná čiara na obrázku 4). Táto citlivá selektivita ohniskovej roviny je tiež princípom určenia smeru výšky a rozšírenia hĺbky ohniska konfokálneho mikroskopu. Na rozdiel od toho bežný optický mikroskop nemá zjavné zmeny jasu pred a po polohe zaostrenia (bodkovaná čiara na obrázku 4).
6. Vysoký kontrast a vysoké rozlíšenie
V bežných optických mikroskopoch bude odrazené svetlo z rozostrenej časti interferovať a prekrývať sa s ohniskovou zobrazovacou časťou, čo má za následok zníženie kontrastu obrazu. Naproti tomu v konfokálnom optickom systéme je rozptýlené svetlo mimo ohniska a rozptýlené svetlo vo vnútri šošovky objektívu takmer úplne odstránené, takže je možné získať obraz s veľmi vysokým kontrastom. Navyše, pretože svetlo prechádza šošovkou objektívu dvakrát, bodový obraz je zaostrený, čo tiež zlepšuje rozlišovaciu schopnosť mikroskopu.
