Základná činnosť fluorescenčného mikroskopu
a. Vypnite svetlá v miestnosti a zapnite ortuťovú lampu mikroskopu;
b. Vyberte zodpovedajúci filter podľa fluoresceínu označeného vzorkou;
c. Umiestnite vzorku a nájdite vhodné zorné pole;
d. Ak potrebujete fotografovať, potvrďte, že je vo fotoaparáte nainštalovaný farebný film;
e. Zapnite zariadenie Selfie, vyberte manuálny prevodový stupeň, rýchlosť snímania je zvyčajne do 0.5-10 sekúnd;
f. Po použití vypnite všetko napájanie a zaznamenajte si používanie. a
a
3. Metóda záznamu fluorescenčného obrazu
Fluorescenčný obraz pozorovaný fluorescenčným mikroskopom má tak morfologické charakteristiky, ako aj fluorescenčnú farbu a jas. Pri posudzovaní výsledkov je potrebné tieto dve veci skombinovať pre komplexné posúdenie. Výsledky sa zaznamenávajú na základe subjektívnych ukazovateľov, teda vizuálneho pozorovania pracovníkmi. Ako všeobecné kvalitatívne pozorovanie v zásade spoľahlivé. S rozvojom technológie a vedy sa na zaznamenávanie výsledkov úsudku v rôznej miere používajú objektívne indikátory, ako sú bunkové spektrofotometre, analyzátory obrazu a iné prístroje. Výsledky zaznamenané týmito nástrojmi sa však musia kombinovať aj so subjektívnymi úsudkami. a
Fotografovanie fluorescenčným mikroskopom je veľmi potrebné na zaznamenávanie fluorescenčných obrázkov. Keďže fluorescencia ľahko mizne a slabne, je potrebné zaznamenávať výsledky v reálnom čase. Metóda je v podstate rovnaká ako pri bežnej mikrofotografii. Stačí použiť vysokorýchlostný fotosenzitívny film. Pretože ultrafialové svetlo má silný vplyv na zhášanie fluorescencie, ako sú markery FITC, jas fluorescencie sa pri ožiarení ultrafialovým svetlom na 30 sekúnd zníži o 50 percent. Preto, ak je rýchlosť expozície príliš nízka, fluorescenčnú snímku nemožno nasnímať. Všeobecné výskumné fluorescenčné mikroskopy majú poloautomatické alebo plne automatické zariadenia fotomikrografie. a
a
4. Bezpečnostné opatrenia pri používaní fluorescenčnej mikroskopie
a. Pracujte striktne v súlade s požiadavkami továrenských pokynov pre fluorescenčný mikroskop a nemeňte program svojvoľne. a
b. Kontrola by sa mala vykonávať v tmavej miestnosti. Po vstupe do tmavej komory pripojte napájanie a zapáľte ultravysokotlakovú ortuťovú výbojku na 5-15 minút. Keď je silné svetlo zo svetelného zdroja stabilné, oči sa úplne prispôsobia tmavej komore a potom začnú pozorovať preparát. a
c. Aby ste predišli poškodeniu očí ultrafialovým žiarením, noste pri nastavovaní svetelného zdroja ochranné okuliare. a
d. Čas kontroly je prednostne vždy 1-2 hodín. Ak presiahne 90 minút, intenzita osvetlenia ultravysokotlakovej ortuťovej výbojky sa postupne zníži a fluorescencia zoslabne; po ožiarení vzorky ultrafialovým svetlom počas 3-5 minút bude fluorescencia tiež výrazne oslabená; preto by to nemalo presiahnuť maximálne 2-3 hodín. . a
e. Životnosť svetelného zdroja fluorescenčného mikroskopu je obmedzená a vzorky by sa mali kontrolovať centrálne, aby sa ušetril čas a ochránil sa svetelný zdroj. Keď je horúce počasie, mali by sa pridať ventilátory, ktoré odvádzajú teplo, a nové žiarovky by sa mali zaznamenávať od začiatku času ich používania. Ak ju chcete po zhasnutí lampy znova použiť, musíte pred zapálením počkať, kým žiarovka dostatočne nevychladne. Vyhnite sa zapáleniu svetelného zdroja niekoľkokrát denne. a
f. Pozorujte vzorku ihneď po farbení, pretože fluorescencia bude časom postupne slabnúť. Ak je vzorka uložená v polyetylénovom plastovom vrecku pri 4 stupňoch, čas zoslabenia fluorescencie sa môže oneskoriť a montážnemu prostriedku možno zabrániť vypareniu. a
g. Posudkový štandard jasu fluorescencie: vo všeobecnosti je rozdelený do štyroch úrovní, to znamená, že "-" znamená, že nie je vidieť žiadnu alebo slabú fluorescenciu. "plus" znamená, že bola pozorovaná iba jasne viditeľná fluorescencia. "plus plus" znamená, že je viditeľná jasná fluorescencia. "plus plus plus" znamená viditeľnú jasnú fluorescenciu.
