Štruktúra a hlavné komponenty fluorescenčného mikroskopu
Fluorescenčná mikroskopia je základným nástrojom v imunofluorescenčnej cytochémii. Skladá sa z hlavných komponentov, ako je zdroj svetla, systém filtračných dosiek a optický systém. Je to použitie určitej vlnovej dĺžky svetla na excitáciu vzorky, aby sa emitovala fluorescencia, a na pozorovanie fluorescenčného obrazu vzorky zosilnením systému šošovky objektívu a okuláru.
Štruktúra a hlavné komponenty fluorescenčného mikroskopu
(1) Svetelný zdroj
V súčasnosti sa ako svetelné zdroje často používajú 200W ultravysokotlakové ortuťové výbojky. Sú vyrobené z kremenného skla, v strede majú guľovitý tvar a vo vnútri je naplnené určité množstvo ortuti. Počas práce výboj medzi dvoma elektródami spôsobuje odparovanie ortuti a tlak vzduchu v guli sa rýchlo zvyšuje. Keď sa ortuť úplne odparí, môže dosiahnuť 50-70 štandardný atmosférický tlak a tento proces vo všeobecnosti trvá asi 5-15 minút. Luminiscencia ultravysokotlakovej ortuťovej výbojky je výsledkom emisie svetelných kvánt počas kontinuálnej disociácie a redukcie molekúl ortuti výbojom medzi elektródami. Vyžaruje silné ultrafialové a modrofialové svetlo, ktoré stačí na excitáciu rôznych fluorescenčných látok, preto má široké využitie vo fluorescenčnej mikroskopii.
Ultravysokotlakové ortuťové výbojky tiež vyžarujú veľa tepla. Preto musí mať lampáreň dobré podmienky na odvod tepla a teplota pracovného prostredia by nemala byť príliš vysoká.
Novú ultravysokotlakovú ortuťovú výbojku je možné na začiatku používania zapáliť bez vysokého napätia. Po určitom čase používania je potrebné ho spustiť pri vysokom napätí (asi 15000V). Po spustení je pracovné napätie pri údržbe vo všeobecnosti 50-60V a pracovný prúd je približne 4A. Priemerná životnosť 200W ultravysokotlakovej ortuťovej výbojky je približne 200 hodín, ak sa používa vždy 2 hodiny. Čím kratší pracovný čas, tým kratšia životnosť. Ak sa používa iba 20 minút, životnosť sa zníži o 50 percent. Preto pri jeho používaní minimalizujte počet spustení. Počas používania žiarovky sa jej svetelná účinnosť postupne znižuje. Keď kontrolka zhasne, pred opätovným spustením počkajte, kým vychladne. Nevypínajte žiarovku ihneď po jej zapálení, aby ste nepoškodili elektródu v dôsledku neúplného odparovania ortuti. Vo všeobecnosti je potrebné počkať 15 minút. Kvôli vysokému tlaku ultravysokotlakovej ortuťovej výbojky a silným ultrafialovým lúčom musí byť žiarovka pred zapálením umiestnená v komore lampy, aby sa nepoškodili oči a nespôsobila činnosť v prípade výbuchu. .
Obvod ultravysokotlakovej ortuťovej výbojky (100W alebo 200W) svetelného zdroja a niekoľkých častí vrátane transformátora, predradníka a štartéra. V komore lampy je systém na nastavenie svetelného stredu žiarovky. Za žiarovkou je inštalovaný pohliníkovaný konkávny reflektor a v prednej časti je inštalovaná šošovka zbierajúca svetlo.
Domáca ultravysokotlaková ortuťová výbojka GCQ-200 má dobrý výkon a môže nahradiť dovážané žiarovky, ako napríklad HBO-200. Priemerná životnosť je viac ako 200h a cena je relatívne nízka.
Jednoduché a prenosné zariadenie s brómovolfrámovým fluorescenčným zdrojom svetla s vysokou farebnou teplotou vyvinuté v mojej krajine má malú veľkosť, nízku hmotnosť, nízku spotrebu, dvojité použitie striedavého a jednosmerného prúdu (s napájaním jednosmerným prúdom), ľahko sa prenáša, ľahko sa používa a má popularizoval a aplikoval.
(2) Systém farebných filtrov
Systém farebných filtrov je dôležitou súčasťou fluorescenčného mikroskopu, ktorý pozostáva z excitačnej filtračnej platne a lisovacej filtračnej platne. Model filtračnej dosky a názov každého výrobcu často nie sú jednotné. Filtračné dosky sú vo všeobecnosti pomenované podľa základnej farby, písmená vpredu predstavujú farbu, písmená v zadnej časti predstavujú sklo a čísla predstavujú vlastnosti modelu. mikroskop olympus
(3) Objektív
Môžu sa použiť rôzne šošovky objektívu, ale používajú sa achromatické šošovky, pretože ich autofluorescencia je minimálna a ich vlastnosti prenosu svetla (rozsah vlnových dĺžok) sú vhodné pre fluorescenciu. Pretože jas fluorescencie obrazu v zornom poli mikroskopu je úmerný druhej mocnine pomeru apertúry šošovky objektívu a nepriamo úmerný jej zväčšeniu, aby sa zlepšil jas fluorescenčného obrazu, šošovka objektívu s veľkým mal by sa použiť pomer clony. Najmä pri veľkom zväčšení je jeho účinok veľmi zrejmý. Preto by sa pri preparátoch s nedostatočnou fluorescenciou mala použiť šošovka objektívu s veľkým apertúrnym pomerom s čo najnižším okulárom (4×, 5×, 6,3× atď.).
(4) Zrkadlo
Reflexná vrstva reflektora je vo všeobecnosti pokovovaná hliníkom, pretože hliník absorbuje menej v modrofialovej oblasti ultrafialového svetla a viditeľného svetla a odraz je viac ako 90 percent, zatiaľ čo odraz striebra je iba 70 percent. Spravidla sa používa plochý reflektor.
(5) Kondenzátor
Kondenzátory určené pre fluorescenčnú mikroskopiu sú vyrobené z kremenného skla alebo iného UV priesvitného skla. Existujú dva typy kondenzorov s čistým poľom a kondenzorov s tmavým poľom. Existujú tiež koncentrátory fluorescencie s fázovým kontrastom.
(6) Epi-svetelné zariadenie
Nový typ epi-svetelného zariadenia spočíva v tom, že po dopade svetla zo svetelného zdroja na interferenčný spektroskopický filter sa časť s krátkou vlnovou dĺžkou (ultrafialová a purpurovo modrá) odráža vďaka vlastnostiam povlaku na filtri. Keď je filter otočený k zdroju svetla, uhol je 45. Keď je naklonený, strieľa na šošovku objektívu vertikálne a cez šošovku objektívu strieľa na preparát, takže preparát je vzrušený. V tomto čase pôsobí šošovka objektívu priamo ako zberač svetla. Zároveň je dlhá časť filtra (zelená, žltá, červená atď.) pre filter priehľadná, takže sa neodráža v smere šošovky objektívu a filter funguje ako doštička excitačného filtra, pretože fluorescencia preparátu je v oblasti s dlhou vlnovou dĺžkou viditeľného svetla, môže prejsť cez filter a dostať sa do okuláru na pozorovanie, jas fluorescenčného obrazu sa zvyšuje so zvyšujúcim sa zväčšením a je silnejší ako prechádzajúce svetlo zdroj pri veľkom zväčšení. Okrem funkcie transmisného svetelného zdroja je vhodnejší na priame pozorovanie nepriehľadných a priesvitných vzoriek, ako sú hrubé plátky, filtračné membrány, kolónie a vzorky tkanivových kultúr. Nové fluorescenčné mikroskopy vyvinuté v posledných rokoch väčšinou využívajú epi-svetelné zariadenia, ktoré sa nazývajú epi-fluorescenčné mikroskopy.
