Porovnanie konfokálneho mikroskopu a bežného optického mikroskopu
Mikroskop je hlavným nástrojom na pozorovanie buniek. V závislosti od svetelného zdroja ho možno rozdeliť do dvoch kategórií: optický mikroskop a elektrónový mikroskop. Prvý používa viditeľné svetlo (ultrafialový mikroskop až ultrafialové svetlo) ako zdroj svetla, zatiaľ čo druhý používa ako zdroj svetla elektrónový lúč. Bežný optický mikroskop a laserový konfokálny mikroskop patria k rovnakému optickému mikroskopu.
I. Všeobecný optický mikroskop
Bežný biologický mikroskop pozostáva z troch častí, a to: ① osvetľovací systém vrátane svetelného zdroja a kondenzora; ② optický zväčšovací systém pozostávajúci z objektívov a okulárov je hlavným telom mikroskopu, aby sa eliminovala sférická a chromatická aberácia, okuláre a objektívy sa skladajú z komplexnej skupiny šošoviek; ③ mechanické zariadenie, ktoré sa používa na upevnenie materiálu a sledovanie pohodlia.
Objekt mikroskopu je jasný nielen určený zväčšením, ale aj rozlišovacou schopnosťou mikroskopu (rozlíšením), rozlišovacia schopnosť sa vzťahuje na mikroskop (alebo ľudské oko od cieľa 25 cm) dokáže rozlíšiť objekt v malých intervaloch schopnosti rozlišovať veľkosť rozlišovacej schopnosti je určená vlnovou dĺžkou svetla a rýchlosťou zrkadlového ústia a indexom lomu média vyjadreným vo vzorci:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 kde: n=index lomu média;=uhol ústia zrkadla (vzorka na ústí šošovky objektívu uhla napätia), NA=miera ústia zrkadla (numerická apertúra). Uhol ústia zrkadla má byť vždy menší ako 180?, takže hodnota zui sina/2 je nevyhnutne menšia ako 1.
Index lomu skla používaného pri výrobe optických šošoviek je 1,65 ~ 1,78, index lomu použitého média čím bližšie k sklu, tým lepšie. Pre suchú šošovku objektívu, médium pre vzduch, je frekvencia zrkadla vo všeobecnosti 0.05 ~ 0,95; olejová šošovka s cédrovým olejom ako médiom, miera zrkadlového ústia môže byť blízko 1,5.
Bežná vlnová dĺžka svetla 400~700 nm, takže hodnota rozlišovacej schopnosti mikroskopu nebude menšia ako 0,2 μm, rozlišovacia schopnosť ľudského oka je 0,2 mm, takže všeobecný dizajn mikroskopu zui zväčšenie je zvyčajne 1000X.
Po druhé, laserový konfokálny skenovací mikroskop
Laserový konfokálny rastrovací mikroskop (laserový konfokálny rastrovací mikroskop), s laserom ako zdrojom skenovacieho svetla, bod po bode, riadok po riadku, povrch po povrchu rýchle skenovanie, skenovací laser a fluorescenčný zber spoločného objektívu, objektívny skenovací laserový zaostrovací bod , ale aj okamžité zobrazenie bodu objektu. Vďaka kratšej vlnovej dĺžke laserového lúča je lúč veľmi jemný, preto má konfokálny laserový skenovací mikroskop vysoké rozlíšenie, asi 3-krát väčšie ako bežný optický mikroskop. Systém je zaostrený raz a skenovanie je obmedzené na jednu rovinu vzorky. Ak hĺbka zaostrenia nie je rovnaká, možno získať obrázky rôznych úrovní hĺbky vzorky a tieto obrazové informácie sa uložia do počítača, pomocou počítačovej analýzy a simulácie môžu ukázať trojrozmernú štruktúru vzorky bunky. .
