Zvýšenie výhod laserovej skenovacej multifotónovej mikroskopie
Laserová skenovacia multifotónová mikroskopia je hlavným zlepšením oproti optickej mikroskopii. Môže pozorovať hlbokú štruktúru živých buniek, fixovaných buniek a tkanív a môže získať jasné a ostré viacvrstvové štruktúry v rovine Z, teda optické rezy, z ktorých môže zostaviť trojrozmernú pevnú štruktúru vzorky. Konfokálna mikroskopia využíva zdroj laserového svetla, ktorý po expanzii vyplní celú zadnú ohniskovú rovinu šošovky objektívu a potom prechádza cez systém šošoviek šošovky objektívu, aby sa zblížil do veľmi malého bodu v ohniskovej rovine preparátu. V závislosti od numerickej apertúry šošovky objektívu je priemer najjasnejšieho bodu osvetlenia približne 0,25 ~ 0,8 μm a hĺbka je približne 0,5 ~ 1,5 μm . Veľkosť konfokálneho bodu závisí od konštrukcie mikroskopu, vlnovej dĺžky lasera, charakteristík šošovky objektívu, nastavenia stavu skenovacej jednotky a vlastností vzorky. Mikroskopia poľa má veľký rozsah a hĺbku osvetlenia, zatiaľ čo konfokálna mikroskopia má zaostrené osvetlenie zamerané na ohnisko v ohniskovej rovine. Najzákladnejšou výhodou konfokálnej mikroskopie je, že môže vykonávať jemné optické rezy hrubých fluorescenčných vzoriek (ktoré môžu dosiahnuť 50 μm alebo viac) a hrúbka rezov je približne 0,5 až 1,5 μm. Sériu obrazov optických rezov možno získať pohybom preparátu nahor a nadol pomocou krokového motora osi Z mikroskopu. Získavanie obrazových informácií je riadené v rovine a nebude rušené signálmi vysielanými z iných miest na vzorke. Po odstránení vplyvu fluorescencie pozadia a zvýšení pomeru signálu k šumu sa kontrast a rozlíšenie konfokálnych obrazov výrazne zlepšili v porovnaní s tradičnými fluorescenčnými obrázkami s osvetlením poľa. V mnohých vzorkách je mnoho zložitých štrukturálnych komponentov prepletených, aby vytvorili komplexné systémy, ale akonáhle je možné zhromaždiť dostatok optických rezov, môžeme ich pomocou softvéru rekonštruovať v troch rozmeroch. Táto experimentálna metóda bola široko používaná v biologickom výskume na objasnenie zložitých štruktúrnych a funkčných vzťahov medzi bunkami alebo tkanivami.
