Fluorescenčný mikroskop používa metódy a preventívne opatrenia
Spôsob použitia:
(1) Umiestnite list materiálu na nosič.
(2)Zapnite regulátor napätia fluorescenčného mikroskopu. Potom stlačením štartovacej skupiny zapnite UV lampu, ktorá sa nevypne 15 minút a po vypnutí sa nesmie reštartovať 3 minúty.
(3) Otočte budiaci filter na v, dichroický film na v, vyberte blokovací filter 495 alebo 475 nm.
(4) Vyberte fluorescenčnú mikroskopiu objektívu prijímajúcu uvFL40, uvFL100.
(5) Pridajte nefluorescenčný olej na sklíčko, najskôr 40 x a potom 100 x zaostrovaciu mikroskopiu. Ukážte fluorescenciu.
(7) Pretože fluorescenčný materiál ultrafialovým žiarením s rastom fluorescencie v priebehu času postupne slabol, pri mikroskopickom vyšetrení by sa malo často meniť zorné pole.
(8) môže použiť aj mikroskopický materiál uvFL10 alebo uvFL20 s malým zväčšením (s malým zväčšením bez pridania nefluorescenčného oleja).
Metóda záznamu fluorescenčného obrazu:
Fluorescenčný obraz pozorovaný fluorescenčným mikroskopom, jeden je s morfologickými charakteristikami, druhý je s farbou a jasom fluorescencie, pri posudzovaní výsledkov je potrebné tieto dva kombinovať s komplexným úsudkom. Výsledky sa zaznamenávajú podľa subjektívnych ukazovateľov, tj vizuálnym pozorovaním pracovníka. Ako všeobecné kvalitatívne pozorovanie v zásade spoľahlivé. S rozvojom technológie a vedy sa v rôznej miere využívali objektívne indikátory na zaznamenávanie výsledkov úsudku, ako je použitie bunkového spektrofotometra, analyzátora obrazu a iných nástrojov. Výsledky zaznamenané týmito prístrojmi sa však musia kombinovať aj so subjektívnym úsudkom.
Technológia fotografovania pomocou fluorescenčného mikroskopu je veľmi potrebná na zaznamenávanie fluorescenčných obrázkov, pretože fluorescencia ľahko vybledne a zoslabne, aby sa okamžite zaznamenali výsledky fotografie. Metóda je v podstate rovnaká ako obyčajná mikrografia. Stačí použiť vysokorýchlostný fotografický film, ako je ASA200 vyššie alebo 24. vyššie. Pretože ultrafialové svetlo na fluorescenčný burst efekt, ako sú FITC markery, pri ožiarení ultrafialovým svetlom 30 s, fluorescenčný jas sa znížil o 50 %. Preto je rýchlosť expozície príliš nízka na zachytenie fluorescenčného obrazu. Všeobecné výskumné fluorescenčné mikroskopy majú poloautomatické alebo plne automatické zariadenia mikrofotografického systému.
Prevencia:
(1) Pracujte v prísnom súlade s požiadavkami továrenskej príručky fluorescenčného mikroskopu, svojvoľne nemeňte postup.
(2) Kontrola by sa mala vykonávať v tmavej komore. Po vstupe do tmavej komory pripojte napájanie, zapáľte ultravysokotlakovú ortuťovú výbojku na 5-15min, počkajte, kým svetelný zdroj vyžaruje silné svetlo, aby sa stabilizoval a oči sa úplne prispôsobili tmavej komore a potom začnite pozorovať vzorku.
(3) Aby ste predišli poškodeniu očí ultrafialovým svetlom, pri nastavovaní svetelného zdroja by ste mali nosiť ochranné okuliare.
(4) skontrolujte, či je čas vždy vhodný na 1 ~ 2 hodiny, viac ako 90 minút, intenzita osvetlenia ultravysokotlakovej ortuťovej lampy sa postupne znižuje, fluorescencia sa oslabuje; vzorky ožiarené ultrafialovým svetlom 3 ~ 5min, fluorescencia je tiež výrazne oslabená; preto * nesmie byť dlhšie ako 2 ~ 3 hodiny.
(5) životnosť svetelného zdroja fluorescenčného mikroskopu je obmedzená, vzorka by mala byť centralizovaná, aby sa ušetril čas a chránil zdroj svetla. Keď je horúca, treba pridať chladenie ventilátorom, novú žiarovku treba zaznamenať od začiatku používania času. Keď lampa zhasne a chce sa znovu použiť, musí byť žiarovka pred rozsvietením dostatočne ochladená. Svetelný zdroj by sa mal niekoľkokrát vyhnúť.
(6) Pozorujte vzorku ihneď po farbení, pretože fluorescencia sa bude časom postupne znižovať. Ak je vzorka umiestnená v polyetylénovom plastovom vrecku skladovanom pri 4 stupňoch, môže to oddialiť čas zoslabenia fluorescencie a zabrániť vyparovaniu tesniaceho prostriedku.
(7) Kritériá hodnotenia jasu fluorescencie: vo všeobecnosti rozdelené do štyroch úrovní, to znamená „jedna“ – žiadna alebo viditeľná slabá fluorescencia. '+' - iba jasne viditeľná fluorescencia. '+ +' - viditeľné s jasným svetlom
