Ako sa fluorescenčná mikroskopia líši od konfokálnej laserovej mikroskopie
Fluorescenčný mikroskop
1. Fluorescenčný mikroskop používa ultrafialové svetlo ako zdroj svetla na osvetlenie kontrolovaného objektu, aby vyžaroval fluorescenciu, a potom pozoruje tvar a umiestnenie objektu pod mikroskopom. Fluorescenčná mikroskopia sa používa na štúdium absorpcie a transportu látok v bunkách, ako aj distribúcie a umiestnenia chemických látok. Niektoré látky v bunkách, ako napríklad chlorofyl, môžu po ožiarení ultrafialovými lúčmi fluoreskovať; niektoré látky samotné nemôžu fluoreskovať, ale ak sú zafarbené fluorescenčnými farbivami alebo fluorescenčnými protilátkami, môžu po ožiarení ultrafialovými lúčmi fluoreskovať. Fluorescenčná mikroskopia je jedným z nástrojov kvalitatívneho a kvantitatívneho výskumu takýchto látok.
2. Princíp fluorescenčného mikroskopu:
(A) Svetelný zdroj: Svetelný zdroj vyžaruje svetlo rôznych vlnových dĺžok (od ultrafialového po infračervené).
(B) Svetelný zdroj excitačného filtra: prenáša svetlo špecifickej vlnovej dĺžky, ktorá môže spôsobiť fluorescenciu vzorky, pričom blokuje svetlo, ktoré je na stimuláciu fluorescencie zbytočné.
(C) Fluorescenčné vzorky: Vo všeobecnosti zafarbené fluorescenčnými pigmentmi.
(D) Blokovací filter: Blokuje excitačné svetlo, ktoré nie je absorbované vzorkou a selektívne prenáša fluorescenciu. Niektoré vlnové dĺžky vo fluorescencii sú tiež selektívne prenášané. Mikroskop, ktorý využíva ultrafialové svetlo ako zdroj svetla, aby spôsobil fluorescenciu osvetleného objektu. Elektrónový mikroskop bol prvýkrát zostavený v roku 1931 v Berlíne v Nemecku firmou Knorr a Hallowska. Tento mikroskop používa vysokorýchlostný elektrónový lúč namiesto svetelného lúča. Keďže vlnová dĺžka toku elektrónov je oveľa kratšia ako vlnová dĺžka svetla, zväčšenie elektrónového mikroskopu môže dosiahnuť 800,000-násobok a minimálny limit rozlíšenia je 0,2 nanometrov. Rastrovací elektrónový mikroskop, ktorý sa začal používať v roku 1963, umožňuje ľuďom vidieť drobné štruktúry na povrchu predmetov.
3. Rozsah aplikácie: Používa sa na zväčšenie obrázkov malých predmetov. Všeobecne sa používa pri pozorovaní biológie, medicíny, mikroskopických častíc atď.
konfokálny mikroskop
1. Konfokálny mikroskop pridáva k optickej dráhe odrazeného svetla semireflexnú pološošovku, ktorá láme odrazené svetlo, ktoré prešlo šošovkou, do iných smerov. V ohnisku je prepážka s dierkou a dierka sa nachádza. V ohnisku za ozvučnicou je trubica fotonásobiča. Možno si predstaviť, že odrazené svetlo pred a po zaostrení detekčného svetla prechádza týmto konfokálnym systémom a nemôže byť zaostrené na malý otvor a bude blokované prepážkou. Čo teda fotometer meria, je intenzita odrazeného svetla v ohnisku.
2. Princíp: Tradičné optické mikroskopy využívajú zdroje poľného svetla a obraz každého bodu na vzorke bude rušený difrakciou alebo rozptýleným svetlom zo susedných bodov; laserové skenovacie konfokálne mikroskopy používajú laserové lúče na vytváranie bodových svetelných zdrojov cez osvetľovacie dierky na osvetlenie vnútrajšku vzorky. Každý bod ohniskovej roviny je naskenovaný a osvetlený bod na vzorke je zobrazený v detekčnej dierke, ktorá je prijímaná bod po bode alebo riadok po riadku fotonásobičom (PMT) alebo studeným spojovacím zariadením (cCCD) za detekciou. dierka a rýchlo sa vytvorí fluorescenčný obraz na obrazovke monitora počítača. Iluminačná dierka a detekčná dierka sú spojené s ohniskovou rovinou šošovky objektívu. Body na ohniskovej rovine sú súčasne zaostrené na osvetľovaciu a emisnú dierku. Body mimo ohniskovej roviny sa v detekčnej dierke nezobrazia. Toto sa získa Konfokálne obrazy sú optické prierezy vzoriek, ktoré prekonávajú nedostatky rozmazaných obrazov v bežných mikroskopoch.
3. Oblasti použitia: Zahŕňajúce medicínu, vedecký výskum zvierat a rastlín, biochémiu, bakteriológiu, bunkovú biológiu, tkanivovú embryológiu, potravinárstvo, genetiku, farmakológiu, fyziológiu, optiku, patológiu, botaniku, neurovedu, morskú biológiu a vedu o materiáloch, elektronickú vedu , mechanika, ropná geológia, mineralógia.
