Úvod do výhod a nevýhod multifotónovej laserovej skenovacej mikroskopie
1. Pri použití červeného svetla alebo infračerveného svetla na excitáciu je rozptyl svetla malý a rozptyl malých častíc je nepriamo úmerný štvrtej mocnine vlnovej dĺžky.
2. Viac rozptýlených fotónov zo zobrazovacieho prierezu možno zhromaždiť bez potreby dierok.
3. Dierka nedokáže rozlíšiť rozptýlené fotóny emitované z rozostrenej oblasti alebo oblasti zaostrenia a pomer signálu k šumu pri viacfotónovom zobrazovaní v hlbokých vrstvách je dobrý.
4. Ultrafialové alebo viditeľné svetlo používané na jednofotónovú excitáciu je ľahko absorbované a zoslabené vzorkou predtým, ako lúč dosiahne ohniskovú rovinu, a je ťažké excitovať hlboké vrstvy.
5. Z hľadiska pozorovania biologickým mikroskopom je prvoradým hľadiskom nepoškodzovať aktívny stav samotného organizmu a udržiavať prúdenie vody, koncentráciu iónov, kyslíka a živín. V prípade pozorovania svetla musí tepelná aj fotónová energia zostať v rozsahu ožiarenia a svetelnej energie, aby sa bunky nepoškodili.
6. Multifotónová mikroskopia má mnoho výhod. Ako trojrozmerné rozlíšenie, hĺbková penetrácia, účinnosť rozptylu, svetlo pozadia, pomer signálu k šumu, ovládanie atď., všetky majú vlastnosti, ktoré predchádzajúce laserové mikroskopy nemali alebo s ktorými nemohli porovnávať.
Nevýhody multifotónovej laserovej skenovacej mikroskopie:
1. Dokáže zobraziť iba fluorescenciu.
2. Ak vzorka obsahuje chromofóry, ktoré absorbujú excitačné svetlo, vzorka môže byť tepelne poškodená.
3. Rozlíšenie je mierne znížené. Aj keď sa to dá zlepšiť súčasným použitím konfokálnych otvorov, dochádza k strate signálu.
4. Obmedzené drahými ultrarýchlymi lasermi, náklady na multifotónové skenovacie mikroskopy sú relatívne vysoké.
