Príprava a pozorovanie biologických vzoriek pre elektrónové mikroskopy
Rozlíšenie mikroskopu závisí od vlnovej dĺžky použitého svetla. Elektrónový mikroskop, ktorý sa objavil v roku 1933, dosiahol výrazne vyššie rozlíšenie ako optický mikroskop vďaka použitiu elektrónových lúčov s vlnovými dĺžkami oveľa kratšími ako viditeľné svetlo ako svetelné zdroje. Rôzne svetelné zdroje tiež určujú rad rozdielov medzi elektrónovými mikroskopmi a optickými mikroskopmi.
Na základe rozdielov v princípoch zobrazovania elektrónovým lúčom a spôsoboch ich pôsobenia na vzorky sa moderné elektrónové mikroskopy vyvinuli do mnohých typov. V súčasnosti sa najčastejšie používajú transmisné elektrónové mikroskopy a rastrovacie elektrónové mikroskopy. Prvý má celkové zväčšenie, ktoré sa môže meniť medzi 1000-10000000-krát, zatiaľ čo druhý má celkové zväčšenie, ktoré sa môže meniť medzi 20-300000-krát. Tento experiment predstavuje najmä prípravu dvoch typov mikroskopických vzoriek, transmisnú elektrónovú mikroskopiu a skenovaciu elektrónovú mikroskopiu.
2, Vybavenie
1. Kmeň Escherichia coli je naklonený.
2. Roztok alebo činidlo: pentylacetát, koncentrovaná kyselina sírová, bezvodý etanol, sterilná voda, 2% vodný roztok fosfowolfrámanu sodného (pH 6,5-8,0), roztok 0,3% polyvinylformaldehydu (rozpustený v chloroforme), cytochróm c, octan amónny, plazmid pBR322.
3. Nástroje alebo iné nástroje zahŕňajú bežné optické mikroskopy, medené sieťky, porcelánové lieviky, kadičky, Petriho misky, sterilné kvapkadlá, sterilné pinzety, špendlíky, sklenené podložné sklíčka, počítacie doštičky, vákuové nanášacie stroje, sušičky kritických bodov atď.
3, Prevádzkové kroky
(1) Príprava a pozorovanie vzoriek pre transmisnú elektrónovú mikroskopiu
1. Úprava kovovej siete
Vzorka optického mikroskopu sa umiestni na sklíčko na pozorovanie. Avšak v transmisnom zrkadle, keďže elektróny nemôžu prenikať sklenenou tabuľou, môže byť ako nosič použitý len sieťový materiál, ktorý sa bežne označuje ako nosná sieť. Nosné pletivo možno rozdeliť do rôznych špecifikácií vďaka rôznym materiálom a tvarom, medzi ktorými sa bežne používa medené pletivo s 200-400 okami (počet otvorov). Medenú sieťku pred použitím ošetrite, aby ste odstránili nečistoty a udržali ju čistú, inak to ovplyvní kvalitu podpornej fólie a jasnosť fotografií. Medenú sieťku s veľkosťou 400 mesh použitú v tomto experimente možno spracovať nasledujúcim spôsobom: najprv namočiť a nechať plávať v pentylacetáte niekoľko hodín, potom niekoľkokrát opláchnuť destilovanou vodou a nakoniec medenú sieťku ponoriť a nechať plávať v bezvodom etanole kvôli dehydratácii. Ak medené pletivo po vyššie uvedených metódach stále nie je čisté, možno ho na 1-2 minúty namočiť do zriedenej koncentrovanej kyseliny sírovej (1:1) alebo niekoľko minút povariť v 1% roztoku NaOH, niekoľkokrát opláchnuť destilovanou vodou a potom dehydrovať v bezvodom etanole na neskoršie použitie.
