Príprava a pozorovanie biologických vzoriek pre elektrónovú mikroskopiu
Rozlíšenie mikroskopu závisí od vlnovej dĺžky použitého svetla, elektrónový mikroskop sa začal objavovať v roku 1933 je spôsobený použitím oveľa kratšej vlnovej dĺžky ako viditeľné svetlo elektrónového lúča ako zdroja svetla, takže rozlíšenie to môže dosiahnuť, než optický mikroskop výrazne zlepšil. Rôzny zdroj svetla tiež určuje rad rozdielov medzi elektrónovým mikroskopom a optickým mikroskopom.
Podľa rozdielov v princípe zobrazovania elektrónového lúča a úlohe vzorky na rôznych cestách bol vyvinutý moderný elektrónový mikroskop, aby vytvoril množstvo typov, v súčasnosti * bežne používaný je transmisný elektrónový mikroskop a skenovací elektrón mikroskop, prvý môže byť v rozsahu 1,000-1,000,000-násobku celkového zväčšenia rozsahu zmien, druhý môže byť v celkovom zväčšení { {4}}, 000-násobok celkového zväčšenia zmien medzi nimi. Tento experiment sa zameriava na prípravu vzoriek pre dva typy mikroskopov, transmisný elektrónový mikroskop a rastrovací elektrónový mikroskop.
Materiály
1. Kmeň Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) šikmo.
2. Roztoky alebo činidlá Amylacetát, koncentrovaná kyselina sírová, bezvodý etanol, sterilná voda, 2 % sodná soľ kyseliny fosfowolfrámovej (pH 6.5-8.0), vodný roztok, 0,3 % roztok polyvinylformaldehydu (rozpustený v trichlórmetáne), cytochróm c, octan amónny, plazmid pBR322.
3. Nástroje alebo iné príslušenstvo Bežný optický mikroskop, medená sieťka, porcelánový lievik, kadička, plochá miska, sterilná byreta, sterilná pinzeta, lanceta, sklíčka, ** počítacia doštička, vákuová nanášačka, sušička kritických bodov atď.
Prevádzkové kroky
(I) Príprava vzorky a pozorovanie transmisnou elektrónovou mikroskopiou
1. Úprava kovovej siete
Vzorky pre optickú mikroskopiu sa umiestnia na sklíčka na pozorovanie. Avšak v transmisnej elektrónovej mikroskopii, keďže elektróny nemôžu preniknúť sklenenou tabuľou, môže byť ako nosič použitý iba sieťový materiál, ktorý sa zvyčajne nazýva nosná sieť. Nosné pletivo možno rozdeliť do mnohých rôznych špecifikácií v dôsledku rôznych materiálov a tvarov, z ktorých * bežne používaná je 200-400 pletivo (počet otvorov) medené pletivo. Medenú sieťku pred použitím ošetrite, aby ste z nej odstránili nečistoty a udržali ju čistú, inak to ovplyvní kvalitu nosnej fólie a jasnosť fotografií. Medené sito použité v tomto experimente je 400 mesh, ktoré možno spracovať nasledujúcim spôsobom: najprv ho bielite niekoľko hodín amylacetátom, potom ho niekoľkokrát opláchnite destilovanou vodou a potom ho vybielte v bezvodom etanole. dehydratácia. Ak medená sieťka podľa vyššie uvedenej metódy stále nie je čistá, možno ju použiť na zriedenie koncentrovanej kyseliny sírovej (1:1) ponorenú na 1 ~ 2 minúty alebo do 1% roztoku NaOH vareného niekoľko minút, niekoľkokrát opláchnuť destilovanou vodou. , umiestnený v dehydratácii bezvodým etanolom, ktorý sa má použiť.
2. Príprava nosného filmu
Pri pozorovaní vzoriek by mala byť nosná sieť pokrytá vrstvou neštruktúrovaného rovnomerného filmu, inak malé vzorky vytečú z otvorov v nosnej sieti, táto vrstva filmu sa zvyčajne nazýva nosný film alebo nosný film. Nosná fólia by mala byť priehľadná pre elektróny a jej hrúbka by mala byť vo všeobecnosti menšia ako 20 nm; pri dopade elektrónového lúča by mala mať fólia tiež určitý stupeň mechanickej pevnosti, môže udržiavať stabilitu konštrukcie a má dobrú tepelnú vodivosť; okrem toho by nosná sieť nemala mať žiadnu viditeľnú štruktúru pod elektrónovým mikroskopom a nemala by chemicky reagovať s prenášanou vzorkou a neinterferovať s pozorovaním vzorky a jej hrúbka je vo všeobecnosti asi 15 nm. Nosná fólia môže byť vyrobená z plastovej fólie (napr. ohnivá bavlnená fólia, polyetylénová formaldehydová fólia atď.), uhlíková fólia alebo kovová fólia (napr. berýliová fólia atď.). V bežných pracovných podmienkach je možné požiadavky splniť s plastovou fóliou, pričom príprava plastovej fólie v požiarnej bavlnenej lepiacej fólii je relatívne jednoduchá, ale pevnosť nie je taká silná ako polyetylénová formaldehydová fólia.
