Požiadavky na výrobu preparátov fluorescenčného mikroskopu
(1) Podložné sklo
Hrúbka sklíčka by mala byť medzi 0,8 až 1,2 mm. Ak je sklíčko príliš hrubé, na jednej strane absorbuje viac svetla a na druhej strane nemôže spôsobiť hromadenie excitačného svetla na vzorke. Podložné sklíčko musí byť hladké, rovnomernej hrúbky a bez zjavnej spontánnej fluorescencie. Niekedy sú potrebné sklíčka z kremenného skla.
(2) Krycie sklíčko
Hrúbka krycieho skla je približne 0,17 mm, čo je hladké a čisté. Na zvýšenie budenia je možné použiť aj interferenčné krycie sklo. Ide o špeciálne navrhnuté krycie sklo s niekoľkými vrstvami látok (napríklad fluorid horečnatý), ktoré majú rôzne interferenčné účinky na rôznych vlnových dĺžkach svetla. Môže umožniť hladký prechod fluorescencie, zatiaľ čo excitácia odrazom môže excitovať vzorku.
（3） Vzorka
Plátky tkaniva alebo iné vzorky by nemali byť príliš hrubé, pretože excitačné svetlo sa väčšinou spotrebuje v spodnej časti preparátu, zatiaľ čo horná časť priamo pozorovaná šošovkou objektívu nie je úplne excitovaná. Okrem toho môže úsudok ovplyvniť prekrývanie buniek alebo maskovanie nečistôt.
(4) Tesniaci prostriedok
Glycerín sa bežne používa ako upevňovacie činidlo a musí byť bez spontánnej fluorescencie, bezfarebný a priehľadný. Jas fluorescencie je jasnejší pri pH 8,5 ~ 9,5 a nie je ľahké rýchlo vyblednúť. Preto sa ako tesniaci prostriedok bežne používa rovnaká zmes glycerolu a 0,5 mol/l uhličitanového pufra pri pH 9.0-9,5.
（5） Zrkadlový olej
Pri pozorovaní preparátov pomocou fluorescenčného mikroskopu v tmavom poli a olejového mikroskopu je potrebné použiť olej na šošovky. Najlepšie je použiť špeciálne vyrobený nefluoreskujúci olej na šošovky, ktorý možno nahradiť aj glycerolom, ako je uvedené vyššie. Možno použiť aj tekutý parafín, ale index lomu je nízky a má mierny vplyv na kvalitu obrazu.
Bezpečnostné opatrenia pri používaní fluorescenčného mikroskopu
(1) Prísne dodržiavajte požiadavky továrenskej príručky fluorescenčného mikroskopu a svojvoľne nemeňte program.
(2) Kontrola by sa mala vykonávať v tmavej miestnosti. Po vstupe do tmavej komory pripojte napájanie a zapáľte ultravysokotlakovú ortuťovú výbojku na 5 až 15 minút. Keď svetelný zdroj vyžaruje silné svetlo a stabilizuje sa, oči sa úplne prispôsobia tmavej komore a až potom začnú pozorovať preparát.
(3) Aby ste predišli poškodeniu očí UV žiarením, mali by ste pri nastavovaní svetelného zdroja nosiť ochranné okuliare.
(4) Čas kontroly by mal byť zakaždým 1-2 hodín. Ak presiahne 90 minút, svietivosť ultravysokotlakovej ortuťovej výbojky postupne klesá a fluorescencia slabne; Po vystavení ultrafialovému žiareniu počas 3-5 minút sa fluorescencia vzorky tiež výrazne znížila; Nemalo by to presiahnuť maximálne 2-3 hodín.
(5) Životnosť svetelného zdroja fluorescenčného mikroskopu je obmedzená a vzorka by sa mala kontrolovať centrálne, aby sa ušetril čas a ochránil sa svetelný zdroj. Keď je horúce počasie, mal by sa pridať elektrický ventilátor, ktorý odvedie teplo a ochladí. Pri výmene novej žiarovky by sa mala doba používania zaznamenať od začiatku. Keď sa lampa vypne a chce sa znova použiť, musí pred zapálením počkať, kým žiarovka úplne nevychladne. Vyhnite sa viacnásobnému zapáleniu svetelného zdroja.
(6) Pozorujte vzorku ihneď po zafarbení, pretože fluorescencia časom postupne klesá. Ak je vzorka uložená v polyetylénovom plastovom vrecku pri 4 stupňoch, môže to oneskoriť čas zoslabenia fluorescencie a zabrániť vyparovaniu upevňovacieho činidla.
(7) Posudzovací štandard pre jas fluorescencie je vo všeobecnosti rozdelený do štyroch úrovní, a to "jedna" - žiadna alebo viditeľná slabá fluorescencia. +- Vidno iba jasne viditeľnú fluorescenciu. ++- Viditeľné pri jasnej fluorescencii. '+++' - Viditeľná a oslnivá fluorescencia.
