Silné stránky a obmedzenia multifotónových laserových skenovacích mikroskopov
Výhody sú nasledovné:
1. Pri excitácii červeným alebo infračerveným svetlom je rozptyl svetla malý (rozptyl malých častíc je nepriamo úmerný štvrtej mocnine vlnovej dĺžky).
2. Nie sú potrebné dierky, ktoré dokážu zhromaždiť viac rozptýlených fotónov zo zobrazovacieho prierezu-.
3. Dierky nedokážu rozlíšiť rozptýlené fotóny vyžarované z rozostrených alebo ohniskových oblastí a multifotóny majú lepší pomer signálu-k{2}}šumu pri hĺbkovom zobrazovaní.
4. Ultrafialové alebo viditeľné svetlo používané na excitáciu jedného fotónu je ľahko absorbované a zoslabené vzorkou predtým, ako lúč dosiahne ohniskovú rovinu, čo sťažuje excitáciu hlbokých vrstiev.
5. Z hľadiska pozorovania biologickou mikroskopiou je prvoradým hľadiskom nepoškodzovať aktívny stav samotného organizmu a zachovať cirkuláciu vody, koncentráciu iónov, kyslíka a živín. V oblasti pozorovania svetla musí tepelná aj fotónová energia zostať v rámci dávky ožiarenia a svetelná energia, ktorá nepoškodí bunky.
6. Multifotónová mikroskopia má tiež mnoho výhod. Pokiaľ ide o trojrozmerné -rozlíšenie, hĺbkovú inváziu, účinnosť rozptylu, svetlo pozadia, pomer signálu -k{4}}šumu, ovládanie atď., laserové mikroskopy majú bezkonkurenčné alebo vynikajúce vlastnosti, ktoré predchádzajúce laserové mikroskopy nemali.
Multifotónový konfokálny laserový skenovací mikroskop bol rozšírený na rôzne výskumné a aplikačné polia. Dokáže vykonávať trojrozmerné nedeštruktívne pozorovanie vzoriek v ich prirodzenom stave a zlepšovať rozlíšenie a pomer signálu-k{3}}šumu systému. Využívaním zmien vlastností materiálu po viacfotónovej excitácii je možné dosiahnuť trojrozmerné,{4}akékoľvek{5}mikrorozmerné ukladanie údajov} a trojrozmerné ukladanie údajov. má vysokú aplikačnú hodnotu Možno sa domnievať, že s ďalším vývojom mechanických, materiálových a laserových technológií súvisiacich s viacfotónovou konfokálnou mikroskopiou bude mať viacfotónová konfokálna laserová skenovacia mikroskopia väčší rozvoj a širšie aplikácie
Nevýhody sú nasledovné:
1. Len pre fluorescenčné zobrazovanie.
2. Ak vzorka obsahuje chromofóry, ktoré môžu absorbovať excitačné svetlo, ako sú pigmenty, vzorka môže byť vystavená tepelnému poškodeniu.
3. Rozlíšenie je mierne znížené, aj keď sa dá zlepšiť súčasným použitím konfokálnych malých otvorov, dôjde k strate signálu.
4. Vzhľadom na obmedzenia drahých ultrarýchlych laserov sú náklady na multifotónové skenovacie mikroskopy relatívne vysoké.
