Dve bežne používané metódy mikroskopického pozorovania
1, Pozorovanie v tmavom poli
Tmavé zorné pole je v skutočnosti osvetlenie tmavého poľa Jeho charakteristiky sa líšia od jasného zorného poľa, pretože priamo nepozoruje osvetľujúce svetlo, ale skôr pozoruje odrazené alebo ohýbané svetlo kontrolovaného objektu Preto sa zorné pole stáva tmavým pozadím, zatiaľ čo kontrolovaný objekt predstavuje jasný obraz
Princíp tmavého poľa je založený na optickom Tyndallovom jave, kedy prachové častice nie je možné pozorovať ľudským okom, keď sú vystavené silnému svetlu v dôsledku difrakcie spôsobenej silným svetlom Ak sa naň svetlo premieta šikmo, zdá sa, že častice zväčšujú svoj objem v dôsledku odrazu svetla a sú viditeľné pre ľudské oko.
Špeciálnym príslušenstvom potrebným na pozorovanie v tmavom poli je bodové svetlo v tmavom poli. Jeho charakteristikou je, že nedovoľuje, aby lúč svetla prechádzal objektom zdola nahor, ale mení dráhu svetla tak, aby bola nasmerovaná šikmo k objektu, takže osvetľovacie svetlo nevstupuje priamo do šošovky objektívu a využíva jasný obraz vytvorený odrazom alebo difrakčným svetlom na povrchu jasného poľa sledovaného objektu s oveľa vyšším rozlíšením, než je kontrolované tmavé pole. 0,02-0,004
2, metóda kontroly zrkadla fázového kontrastu
Úspešný vynález mikroskopie s fázovým kontrastom pri vývoji optických mikroskopov je dôležitým úspechom modernej mikroskopickej techniky Vieme, že ľudské oko dokáže rozlíšiť iba vlnovú dĺžku (farbu) a amplitúdu (jas) svetelných vĺn. V prípade bezfarebných a priehľadných biologických vzoriek sa pri prechode svetla vlnová dĺžka a amplitúda príliš nemenia, čo sťažuje pozorovanie vzorky v jasnom poli
Mikroskop s fázovým kontrastom využíva rozdiel v dĺžke optickej dráhy kontrolovaného objektu na zrkadlovú kontrolu, pričom efektívne využíva interferenčný jav svetla na transformáciu fázového rozdielu, ktorý ľudské oko nedokáže rozlíšiť, na rozlíšiteľný rozdiel amplitúdy. Dokonca aj bezfarebné a priehľadné látky sa môžu stať jasne viditeľnými To výrazne uľahčuje pozorovanie živých buniek, preto sa mikroskopia s fázovým kontrastom široko používa v inverzných mikroskopoch
Základným princípom mikroskopie s fázovým kontrastom je previesť rozdiel v optickej dráhe viditeľného svetla prechádzajúceho vzorkou na rozdiel amplitúd, čím sa zlepší kontrast medzi rôznymi štruktúrami a sú jasné a viditeľné. Po prechode vzorkou sa svetlo lomí, odchyľuje sa od pôvodnej optickej dráhy a je oneskorené o 1/4 λ (vlnová dĺžka). Ak sa rozdiel optickej dráhy zvýši alebo zníži o ďalšiu 1/4 λ, rozdiel v optickej dráhe sa stane 1/2 λ a interferencia medzi dvoma svetelnými lúčmi sa zvýši alebo zníži po spojení osi, čím sa zlepší kontrast Z hľadiska štruktúry majú mikroskopy s fázovým kontrastom dva
špeciálne rozdiely od bežných optických mikroskopov:
1. Prstencová clona je umiestnená medzi zdrojom svetla a kondenzorom a jej funkciou je vytvárať dutý kužeľ svetla, ktorý prechádza cez kondenzor a zaostruje na vzorku
2. Uhlová fázová doštička: Fázová doštička potiahnutá fluoridom horečnatým je pridaná k šošovke objektívu, ktorá môže oneskoriť fázu priameho alebo difraktovaného svetla o 1/4 λ. Dá sa rozdeliť na dva typy:
(1) . A+fázová doska: Oneskorte priame svetlo o 1/4 λ a po spojení osí pridajte dve sady svetelných vĺn. Amplitúda sa zvyšuje a štruktúra vzorky sa stáva jasnejšou ako okolité médium, čím sa vytvára jasný kontrast (alebo negatívny kontrast)
(2) . B+fázová doska: Oneskorte difraktované svetlo o 1/4 λ a odpočítajte svetelné vlny po spojení osí dvoch sád svetelných lúčov, čo vedie k zníženiu amplitúdy a vytvoreniu tmavého kontrastu (alebo pozitívneho kontrastu). Štruktúra sa stáva tmavšou ako okolité médium
