Prečo je zväčšenie olejovej šošovky väčšie ako zväčšenie bežnej šošovky objektívu?
Dôvody, prečo je potrebné baktérie pred farbením v mikrobiologických experimentoch fixovať:
1: Zabíja bunky, ľahko sa farbí farbivom.
2: Nechajte baktérie priľnúť k podložnému sklíčku a nie je ľahké ich zmyť vodou.
Pri fixácii by sa mal pomaly sušiť. Ak chcete naozaj zrýchliť, môžete ho párkrát osušiť v diaľke nad plameňom liehovej lampy. Nedovoľte, aby sa sklíčko zahrialo, inak môže zničiť životnú formu baktérií.
Gramovo farbenie a mikroskopické pozorovanie baktérií
1. Experimentálny princíp
Princíp farbenia podľa Grama: Baktérie reagujú na farbenie podľa Grama odlišne v dôsledku zloženia a štruktúry ich bunkových stien. Bunková stena grampozitívnych baktérií je hlavne sieťový uzol tvorený peptidoglykánom. Pri pôsobení etanolu sa veľkosť pórov sieťovej štruktúry v dôsledku dehydratácie zmenšuje a priepustnosť sa znižuje, takže komplex kryštálovej fialovej a jódu Látka sa nedá ľahko eluovať a udržať v bunke a modrá- fialová farba primárneho farbiaceho činidla je stále zachovaná po odfarbení a kontrastnom farbení. Peptidoglykánová vrstva bunkovej steny gramnegatívnych baktérií je tenká a obsah lipidov je vysoký, takže keď sa vykoná odfarbovacie ošetrenie, lipid sa rozpustí etanolom (alebo acetónom) a priepustnosť bunkovej steny sa zvýši, takže že komplex kryštálová violeť-jód Ľahšie sa vymýva a po kontrastnom farbení kontrastným farbením sa bunky farbia červenou farbou kontrastného farbenia. Princíp mikroskopického zobrazovania: Moderné bežné optické mikroskopy používajú na zväčšenie obrazu dva šošovkové systémy okuláru a šošovky objektívu, preto sa často nazývajú zložené mikroskopy. V optickom systéme mikroskopu je výkon šošovky objektívu najdôležitejší a zväčšenie olejovej šošovky je najväčšie, čo je najdôležitejšie pre mikrobiologický výskum. Hlavným účelom pridania imerzného oleja medzi sklíčko a šošovku je zvýšiť jas osvetlenia a zvýšiť rozlíšenie mikroskopu. Namiesto vzduchu sa ako médium prenosu svetla používa olej, aby sa znížil lom alebo úplný odraz svetla a bol pozorovaný obraz jasnejší.
2. Experimentálne vybavenie
1. Kolónie:
Escherichia coli 24-hodinová šikmá kultúra na živnom agare,
Staphylococcus aureus asi 24-hodinová kultúra na živnom agare, šikmá kultúra Bacillus subtilis 12-18h na živnom agare.
2. Roztoky alebo činidlá:
Destilovaná voda, roztok jódu, roztok na farbenie kryštálovou violeťou, 95 percentný alkohol, roztok na farbenie safranínu, cédrový olej. 3. Nástroj:
Mikroskop, podložné sklíčko, očkovacia slučka, alkoholová lampa, pinzeta, tkanivo na šošovky.
3. Experimentálne kroky
a:
1. Namazať
Vyberte podložné sklíčko, zapáľte podložné sklíčko, vypaľte alkohol na podložnom sklíčku a sterilizujte ho, do stredu dajte malú kvapku destilovanej vody, pomocou očkovacej slučky jemne vyberte malé množstvo baktérií na šikmom médiu testu skúmavka, Počas celého procesu by malo byť ústie skúmavky nad alkoholovou lampou a rýchlosť by mala byť rýchla, aby sa zabránilo kontaminácii kultivačného média. Potom krúživým pohybom rozotrite malé kvapôčky vody na sklíčko, zastavte, keď sú kvapôčky vody zakalené, a počkajte, kým zaschnú a zafixujú sa.
2. Primárne farbenie
Na kolóniu kvapnite kryštálovú violeť (vhodné je len prekryť bakteriálny film), farbiť 1-2 minút, zlejte farbiaci roztok a opláchnite jemnou vodou z vrchu sklíčka, kým eluát nebude bezfarebný, a umiestnite škvrnu na sklíčko. Z plátkov vytrasieme vodu.
3. Moridlo
Po kvapkách pridajte roztok jódu, aby ste zmyli zvyškovú vodu, prikryte asi 1 minútu a premyte vodou.
4. Odfarbenie
Potraste vodou na podložnom sklíčku, nakloňte podložné sklíčko a pridajte 95-percentný alkohol, aby sa odfarbil pod bielym pozadím, až kým vytekajúci alkohol nebude modrý, okamžite alkohol opláchnite vodou a položte podložné sklíčko Potriasť z vody na plátky.
5. Kontrafarbenie
Kontrafarbite roztokom safranínu na približne 1-2 minút, umyte vodou a potom osušte savým papierom
6. Mikroskopické vyšetrenie:
Hľadajte bakteriálnu kolóniu, ktorú chcete pozorovať pod šošovkou s nízkym zväčšením (pokračujte v pohybe sklíčka, ak cítite červený tieň, okamžite zastavte, upravte zväčšenie, ak nejde o kolóniu, pokračujte v hľadaní), zdvihnite tubus šošovky, a potom prepnite na olejové zrkadlo. Pridajte kvapku cédrového oleja do oblasti vzorky a opatrne spustite tubus šošovky pomocou hrubého nastavovača tak, aby bola olejová šošovka ponorená v oleji a takmer sa dotýkala vzorky. Zdvihnite kondenzor do najvyššej polohy a úplne otvorte clonu, pomocou hrubého nastavovača pomaly zdvíhajte tubus objektívu, kým sa v zornom poli neobjaví obraz objektu, a pomocou jemného nastavovača ho urobte jasným a zaostreným.
